Clinical rationale for determinig the ratio sFlt–1/PIGF for the early detection and evaluation of the severity of preeclampsia

Kurtser M.A., Shamanova M.B., Sinitsina O.V., Nikolaeva A.A., Dedlovskaya A.I., Samsonova M.A.

1 Pirogov Russian National Research Medical University; 2 Perinatal Medical Center group of companies «Mother and Child», Moscow, Russia; 3 Clinical hospital «Lapino» group of companies «Mother and Child», Moscow, Russia; 4 Separate structural division «Clinical Hospital IDK», Samara, Russia
Objective. Study of the effectiveness of determining the sFlt-1/PIGF ratio in the diagnosis of pre-eclampsia at the preclinical stage and in cases of erased/atypical course. Subjects and methods. The investigation included 206 pregnant women with suspected PE. According to the sFlt-1/PlGF ratio, all the patients were divided into 2 groups: 1) 118 patients with a sFlt-1/PlGF ratio of <38 (a negative test); 2) 88 with a sFlt-1/PlGF ratio of >38 (a positive test). Results. In Group 1, 6 (5.4%) patients were found to have moderate PE; 112 (96.4%) patients did not develop PE. In Group 2, 32 (36.4%) patients were diagnosed with severe PE; moderate PE was present in 23 (26.1%) patients, PE was absent in 33 (37.5%). In Group 2, the sFlt-1/PlGF ratio in the patients with severe PE was significantly higher than that in those with moderate and no PE: 268 (128–540) vs 80.5 (61.9–116.4) vs 57.5 (42.5–110), P1 < 0.0001 and P2 < 0.0001. Comparing the examined groups in perinatal outcomes and clinical symptoms of PE ascertained that adverse perinatal outcomes (antenatal and postnatal fetal death) and symptoms indicating the development of a critical situation (transient ischemic attack, epigastric pain, and acute renal failure) occurred only in Group 2 patients. Conclusion. Determination of the sFlt-1/PlGF ratio can serve as an additional method to diagnose PE, to evaluate the severity of preeclampsia, and to predict adverse perinatal and maternal outcomes.

Keywords

preeclampsia
placental growth factor (PlGF)
soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1)

По данным ВОЗ преэклампсия (ПЭ) занимает третье место в структуре материнской смертности и составляет 16% в экономически развитых странах и 25% в развивающихся странах [1, 2]. Ведущими причинами материнской смертности при преэклампсии являются цереброваскулярные кровоизлияния 15,8%, почечная и печеночная недостаточность 7,2%, HELLP синдром 4,8% [3]. Преэклампсия лежит в основе таких осложнений беременности как преждевременная отслойка нормально расположенной плаценты (ПОНРП) 1–4%, преждевременные роды (ПР) 15–67%, задержка роста плода (ЗРП) 10–25% [4].

Стертые (атипичные) формы ПЭ, являющиеся доминирующей причиной материнской смертности в развитых странах, также представляют собой сложную диагностическую задачу. По мнению Сидоровой И.С., проведшей анализ материнской смертности в России за 2013–2015 гг., именно атипичная клиническая картина ПЭ является современной особенностью тяжелой преэклампсии; такие симптомы, как выраженная артериальная гипертензия (АГ), массивная протеинурия, анасарка, имели место только у 55,6%, 42,9% и 40,7% погибших [5]. Сходные данные были продемонстрированы Савельевой Г.М. в 2010 г. в отношении эклампсии – самого тяжелого осложнения ПЭ, непосредственно угрожающего жизни женщины. Так, только 25,5% пациенток демонстрировали тяжелую АГ, у 25,5% женщин протеинурия отсутствовала, а все 3 симптома ПЭ имели место только у 58,8% пациенток [6].

Актуальной остается дифференциальная диагностика ПЭ от соматических «масок» преэклампсии, когда пациентки нуждаются в специализированной помощи, а вместо этого госпитализируются в отделения патологии родильных домов. Отсутствие единого патогномоничного клинического симптома преэклампсии с одной стороны, и необходимость дифференциальной диагностики ПЭ с другой стороны, заставили исследователей всего мира сконцентрироваться на поиске лабораторного теста – предиктора преэклампсии. Фундаментальные исследования в области патогенеза преэклампсии легли в основу создания лабораторного маркера этого осложнения беременности.

Современная теория возникновения ПЭ, выдвинутая в 1989 г. Maynard, Roberts и другими исследователями, объясняет генерализованную эндотелиальную дисфункцию, а вместе с ней и все клинические симптомы ПЭ, массивным сбросом в материнское русло sFlt-1 плацентарного происхождения [7]. sFlt-1 (растворимая fms-подобная тирозинкиназа) – антиангиогенный протеин, который является растворимой свободной формой рецептора Flt-1 (VEGFR-1) – рецептора к VEGF (васкулоэндотелиальный фактор роста) и его плацентарному аналогу PlGF (плацентарный фактор роста). Flt-1 (VEGFR-1) связан с мембраной эндотелиальных клеток сосудов всего организма, в том числе и плаценты. При связывании VEGF (PlGF) с Flt-1 рецептором (VEGFR-1) стимулируются развитие плаценты, пролиферация эндотелиальных клеток, васкулогенез. При нормально протекающей беременности PlGF, контактируя с VEGFR-1 эндотелия сосудов, оказывает ангиопротективное, антикоагулянтное, вазодилатирующее действие [10]. В условиях формирующейся плацентарной дисфункции, связанной с нарушениями процессов ремоделирования спиральных сосудов (I плацентарная стадия преэклампсии), на фоне снижения плацентарной перфузии и сниженного синтеза PlGF, в материнское русло активно начинает поступать несвязанная с PlGF растворимая fms-подобная тирозинкиназа (sFlt-1), которая оказывает прокоагулянтное, вазоконстрикторное действие, повреждает эндотелиоциты, приводя к повышению сосудистой проницаемости. С повышением сывороточной концентрации sFlt-1 связывают переход преэклампсии из I плацентарной стадии во II материнскую стадию, в которой появляются клинические симптомы преэклампсии [11, 12].

Доминирующий уровень sFlt-1 над PlGF и, соответственно, высокое соотношение sFlt-1/PlGF в крови беременных пациенток может служить хорошим лабораторным предиктором пре­эк­лам­п­сии. Диаг­ностическая значимость определения соот­но­шения sFlt-1/PlGF у беременных с целью иск­лючения или подтверждения диагноза преэк­лампсия впервые была установлена в ходе про­спек­тив­ного мультицентрового исследования PROGNOSIS (Prediction of Short-Term Outcome in Pregnant Women with Suspected Preeclampsia Study), завершенного в 2016 году [13]. В результате исследования установлено пороговое значение («cut off») соотношения sFlt-1/PlGF для предикции преэклампсии. При sFlt-1/PlGF<38 преэклампсия исключается в течение последующей недели на 99,3% (NPV 99,3%, чувствительность 80,0, специфичность 78,3), при sFlt-1/PlGF>38 развитие преэклампсии ожидается в течение 4-х недель с вероятностью 36,7% (PPV36,7%, чувствительность 66,2, специфичность 83,1).

Однако до настоящего времени нет четкого понимания, какова практическая ценность определение соотношения sFlt-1/PlGF, может ли данный тест использоваться в качестве дополнительного инструмента для выявления преэклампсии на доклинической стадии преэклампсии или в случае стертого/атипичного течения этого осложнения беременности.

Целью настоящего исследования явилось изучение эффективности определения соотношения sFlt-1/PlGF в диагностике преэклампсии на доклинической стадии и в случаях стертого/атипичного течения.

Материал и методы

Исследование проведено на базе Перинатального Медицинского Центра Группы Компаний «Мать и Дитя», Кафедры акушерства и гинекологии педиатрического факультета РНИМУ им. Н.И. Пирогова, лаборатории Клинического Госпиталя Лапино Группы Компаний «Мать и Дитя». В исследование были включены 206 беременных со сроком гестации 20–39 недель.

Критериями включения в исследование явились:

  1. наличие у пациенток факторов высокого риска ПЭ без клинических симптомов ПЭ: хроническая артериальная гипертензия (ХАГ), хронические заболевания почек, ревматологические заболевания, сахарный диабет, высокий риск ПЭ по результатам комбинированного скрининга I триместра, ПЭ в анамнезе, другие проявления плацентарной дисфункции в анамнезе, такие ПОНРП, ЗРП, антенатальная гибель плода в анамнезе;
  2. наличие отдельных симптомов, указывающих на возможное развитие преэклампсии: отеки, патологическая прибавка веса (более 1 кг в не­делю), изолированная протеинурия, изолированная АГ, повышение печеночных трансаминаз (АЛТ>35 Ед/л, АСТ>35 ед./л), снижение уровня тромбоцитов ≤150 тыс./мкл, ЗРП, нарушение показателей допплерометрии кровотока в маточных сосудах;
  3. наличие у пациенток диагноза преэклампсия, установленного в соответствии с клиническими реко­мен­дациями «Гипертензивные расстрой­ства во время беременности, в родах и после­родовом периоде. Преэклампсия. Эклампсия: АГ (Систолическое артериальное давление – САД ≥140 мм рт.ст. и/или диастолическое артериальное давление ДАД ≥90 мм рт.ст.) в сочетании с протеинурией (0,3 г белка и более в суточной моче) после 20 недель беремен­ности [14].

Критерии исключения: пациентки со сроком гес­тации менее 20 недель и пациентки, беременность кото­рых завершилась вне стационаров ГК «Мать и Дитя».

Сывороточная концентрация PlGF и sFlt-1 в крови беременных определена с помощью электро­хемилюминесцентных диагностических тестов Elecsys sFlt-1 концерна «Ф. Хоффманн-Ля Рош» (Швейцария) на автоматических анализаторах Cobas e 411. Для каждого образца крови рассчитано соотношение sFlt-1/ PlGF.

В зависимости от уровня соотношения sFlt-1/ PlGF все 206 беременных разделены на 2 группы: 1 группу составили 118 пациенток с sFlt-1/ PlGF<38 (отрицательный тест), во 2 группу были отнесены 88 пациенток с sFlt-1/ PlGF>38 (положительный тест).

Статистический анализ проводили при помощи программного пакета IBM SPSS Statistics 23,0. Описательная статистика для количественных переменных представлена в виде среднего ± стандартное отклонение М(SD) или медиана, интерквартельный интервал Mе(Q1;Q3) в зависимости от нормальности распределения переменной. Нормальность распределения переменной определяли при помощи построения частотных диаграмм и проверяли при помощи критерия Колмогорова-Смирнова. Описательная статистика для порядковых и качественных переменных представлена в виде частоты и доли (%) каждой категории. Во всех случаях применяли двусторонние варианты статистических критериев. Нулевую гипотезу отвергали при р<0,05.

Для сравнения частот категорий зависимой качественной переменной использовался критерий χ2 или, в случае ожидаемого числа хотя бы одной ячейки таблицы <5, точный критерий Фишера. В случае количественной переменной при количестве категорий независимой переменной более 2, для сравнения использовали дисперсионный анализ (ANOVA).

Результаты исследования

Исследуемые группы не отличались друг от друга по фоновым показателям: возраст, ИМТ, наличие ХАГ, гестационного сахарного диабета (ГСД), хронических заболеваний почек, ЭКО и многоплодия (табл. 1). Однако, первобеременные пациентки чаще встречались во 2 группе: 52,3% vs 29,7% (р< 0,01).

Из 118 пациенток 1-й группы (sFlt-1/ PlGF<38) беременных с диагнозом тяжелая преэклампсия не было, умеренная преэклампсия диагностирована у 6 (5,4%), т.е. имел место ложноотрицательный тест, преэклампсии не было у 112 (94,6%). Средний срок гестации и средний возраст 6 женщин с умеренной преэклампсией составили 36,3 (1,6) недель и 35 (5,7) лет соответственно. 3 из 6 (50%) страдали хрони­ческой артериальной гипертензией, 1 пациентка рев­­ма­тоидным артритом и ГСД, а у 2 ИМТ был более 30, что делало вероятным у них наличие ГСД или не выявленной ранее ХАГ. Возможно, что диагноз ПЭ умеренной был установлен у этих 6 па­циенток формально, а реально имелась протеинурия, вызванная беременностью, на фоне хронической артериальной гипертензии, не диагностированной ранее.

Из 88 пациенток 2-й группы с положительным тестом (sFlt-1/ PlGF>38) диагноз тяжелая преэк­лампсия установлен у 32 беременных (36,4%), умеренная преэклампсия у 23 (26,1%), 33 пациентки (37,5%) не развили клиническую картину преэк­лам­псии (табл. 2, рис. 1, рис. 2).

Изучен уровень соотношения sFlt-1/ PlGF в исследуемых группах. Выявлено, что при тяжелой преэклампсии показатель sFlt-1/ PlGF статистически значимо отличался от показателей при преэклампсии умеренной и при отсутствии у пациенток диагноза преэклампсии: 268 (128–540) vs 81 (62–116) vs 58 (43–110), р1<0,0001 и р2<0,0001. Соотношение sFLt-1/ PLGF у беременных с любой преэклампсией также было выше, чем у пациенток без преэклампсии (табл. 3). Схожие результаты получены профессором Verlohren, в его исследовании уровень sFlt-1/ PlGF для ранней ПЭ составил 506 (54,3) и для поздней ПЭ – 168 (17,7) [15]. В исследовании Theng Theng Chah et all уровень sFlt-1/PlGF при преэклампсии был 146 (61,9–318,5), в случае ран­ней ПЭ – 292 (132,3–556), поздней ПЭ – 63 (28,8–150,8) [16].

Исследованы перинатальные исходы в обеих группах. Выявлено, что срок родоразрешения в группе 2 статистически значимо был меньше, чем срок в группе 1: 35,8 (4,2) нед. vs 37,8 (2,2) нед. p<0,0005. Такие же данные получены в отношении веса и роста новорожденного, в группе 2 преобладали дети с низкой массой тела при рождении: 2567 (1010) г vs 3230 (627) г, p<0,0005, что связано как с более ранними сроками родоразрешения, так и с более частой встречаемостью фето-плацентарной недостаточностью в данной группе. Оценка по шкале Апгар на 5 мин составила 8,8 (0,6) в 1-й группе и 8,1 (0,7) во 2-й группе, р=0,01. В группе положительного теста достоверно чаще рождались дети с выраженной задержкой роста плода по сравнению с группой отрицательного теста: с массой новорожденного менее 5 перцентиля – 24 пациентки (27%), от 5 до 10 перцентиля –14 (16,0%) vs 8 (6,7%), 4 (3,4%) соответственно, р=0,014 [17]. Перинатальные потери (антенатальная гибель плода, n=4 и постнатальная гибель плода, n=4) зафиксированы у 8 пациенток из группы положительного теста при сроке гестации 21–29 недель, причем у всех 8 беременных имела место выраженная задержка роста плода (масса новорожденного менее 5 перцентиля), а у 6 пациенток – сопутствующая тяжелая преэклампсия (табл. 4).

Проведено сравнение исследуемых групп по клинической симптоматике. Уровень САД, ДАД, протеинурия были выше в группе положительного теста по сравнению с группой отрицательного теста: 137 (17) мм.рт.ст, 87 (9 ) мм.рт. ст, 983 (1017) мг/л/сут vs 121 (14) мм.рт. ст, 78 (11) мм.рт. ст, 92 (25) мг/л/сут соответственно, p<0,001. Такие симптомы, как головная боль и боли в эпигастрии, также чаще зарегистрированы в группе пациенток с положительным тестом, чем с отрицательным, 16 (18%), 3 (3%) vs 6 (5%), 0 соответственно, р=0,001, 0,043. Острая почечная недостаточность, транзиторная ишемическая атака имели место только у пациенток 2-й группы. Время пролонгирования беременности от забора теста до родов у пациенток с положительным тестом было статистически значимо меньше, чем в группе отрицательного теста, 11 (11) vs 55 (33) дн (p<0,0001)(табл. 5).

Обсуждение

В нашем исследовании мы показали, что диагноз преэклампсия статистически значимо чаще был установлен у пациенток с положительным тестом по сравнению с отрицательным: 62,5% vs 5,4%, p<0,05, что может оказывать существенную помощь при постановке диагноза преэклампсии, особенно в случае стертых/ атипичных форм этого осложнения беременности.

Так же было установлено, что диагноз тяжелой преэклампсии имел место только при положительном значении теста (sFlt-1/ PlGF>38), таким образом, при отрицательном результате теста диагноз тяжелой преэклампсии исключен.

Диагноз преэклампсия умеренная также доминировал у пациенток при sFlt-1/ PlGF>38 (23 из 29 пациенток с ПЭ умеренной), однако 6 пациенток с ПЭ умеренной имели соотношение sFlt-1/ PlGF<38. Таким образом, отрицательный результат теста не исключает диагноз умеренной преэклампсии, но у таких пациенток возможно наличие сопутствующей соматической патологии, которая может скрываться за маской преэклампсии.

В ходе исследования показано, что уровень соотношения sFlt-1/ PlGF был выше у пациенток с тяжелой преэклампсией по сравнению с беременными с умеренной ПЭ и без преэклампсии: 268 (128–540) vs 81 (62–116) vs 58 (43–110), р1<0,0001 и р2<0,0001, что так же может оказывать помощь в ранней диагностике тяжелой преэклампсии.

Нами установлено, что клинические симптомы преэклампсии были более выражены при sFlt-1/ PlGF>38: уровень артериального давления и степень протеинурии были достоверно выше среди пациенток этой группы. Такие симптомы преэклампсии, как головная боль и боли в эпигастрии, встречались чаще в группе положительного теста. Осложнения преэклампсии: острая почечная недостаточность и транзиторная ишемическая атака имели место только при положительном тесте, что указывает на возможность использования уровня соотношения sFlt-1/ PlGF для определения степени тяжести преэклампсии и прогнозирования неблагоприятных материнских исходов. Более раннее родоразрешение, низкая масса новорожденного и оценка по шкале Апгар, перинатальные потери, косвенно характеризующие степень тяжести преэклампсии, доминировали среди пациенток 2-й группы, поэтому метод определения соотношения sFlt-1/ PlGF может быть ценным для прогнозирования неблагоприятных перинатальных исходов.

Заключение

Наше исследование подтвердило, что определение соотношения sFlt-1/ PlGF может использоваться в качестве дополнительного инструмента для постановки диагноза преэклампсия, особенно в случаях атипичного течения заболевания, для оценки степени тяжести преэклампсии, для дифференциальной диагностики преэклампсии от других гипертензивных осложненений беременности и от соматических «масок» преэклампсии, а также с целью прогнозирования неблагоприятных материнских и перинатальных исходов.

References

1. Khan KS, Wojdyla D, Say L, Gulmezoglu AM,Van Look P F: WHO analysis of causes of maternal death:systematic review. Lancet 2006.

2. Smith TA, Kirkpatrick DR, Kovilam O, Agrawal DK Immunomodulatory role of vitamin D in the pathogenesis of preeclampsia. Expert rev clin immunol. 2015; 11(9): 1055-1063

3. MacKay et al. Preeclampsia and Eclampsia Mortality. obst/gynecology vol 97 N4 2001

4. Sibai B1, Dekker G, Kupferminc M. Pre-eclampsia. Lancet. 2005 Feb 26-Mar 4;365(9461):785-99

5. И.С. Сидорова, Н.А.Никитина, А.Л. Унанян. Преэклампсия и снижение материнской смертности в России. Акушерство и гинекология.2018. N1, с107-112.

6. Г.М. Савельева, Р.И. Шалина, М.А. Курцер, А.М Штабницкий, И.В. Куртенок, О.В. Коновалова. Эклампсия в современном акушерстве. Акушерство и гинекология 2010 N 6, с 4-9

7. Karumanchi SA, Epstein FH. Placental ischemia and soluble fms-like tyrosine kinase 1: cause or consequence of preeclampsia? Kidney Int 2007;71:959-961

8. Kendall RL, Thomas KA. Inhibition of vascular endothelial cell growth factor activity by an endogenously encoded soluble receptor. Proc Natl Acad Sci U S A 1993;90:10705-10709

9. Lu FX, Longo M, Tamayo E, et al. The effect of over-expression of sFlt-1 on blood pressure and the occurrence of other manifestations of preeclampsia

10. Kendall RL, Thomas KA. Inhibition of vascular endothelial cell growth factor activity by an endogenously encoded soluble receptor. Proc Natl Acad Sci U S A 1993;90:10705-10709

11. Lu FX, Longo M, Tamayo E, et al. The effect of over-expression of sFlt-1 on blood pressure and the occurrence of other manifestations of preeclampsia

12. Karumanchi SA1, Maynard SE, Stillman IE, Epstein FH, Sukhatme VP Preeclampsia: a renal perspective. Kidney Int. 2005 Jun;67(6):2101-13

13. Harald Zeisler, M.D., Elisa Llurba, M.D., Ph.D., Frederic Chantraine, M.D., Ph.D., Manu Vatish, M.B., Ch.B., D.Phil., Anne Cathrine Staff, M.D., Ph.D., Maria Sennström, M.D., Ph.D., Matts Olovsson, M.D., Ph.D., Shaun P. Brennecke, M.B., B.S., D.Phil., Holger Stepan, M.D., Deirdre Allegranza, B.A., Peter Dilba, M.Sc., Maria Schoedl, Ph.D., Martin Hund, Ph.D., and Stefan Verlohren, M.D., Ph.D. Predictive Value of the sFlt-1:PlGF Ratio in Women with Suspected Preeclampsia. N Engl J Med 2016; 374:13-22January 7, 2016

14. Гипертензивные расстройства во время беременности, в родах и послеродовом периоде. Преэклампсия.Эклампсия. Клинические рекомендации ( Протокол лечения) 2016г

15. Stefan Verlohren, MD; Ignacio Herraiz, MD; Olav Lapaire, MD; Dietmar Schlembach, MD;Manfred Moertl, MD; Harald Zeisler, MD; Pavel Calda, MD; Wolfgang Holzgreve, MD;The sFlt-1/PlGF ratio in different types of hypertensive pregnancy disorders and its prognostic potential in preeclamptic patients. American Journal of Obstetrics & Gynecology JANUARY 2012

16. Theng Theng Chua, Wan Shi Tey, Mor Jack Ng, Edward T.H. Tan, Bernard Chern. Serum sFLt-1/PIGF ratio has better diagnostic ability in early- compared to late-onset pre-eclampsia. J.Perinat.Med.2018;aop

17. Williams. Obstetrics. 24th Edition. P 874

Received 25.10.2018

Accepted 09.11.2018

About the Authors

Kurtser, Mark A., academician of the Russian Academy of Sciences, professor, MD, Head of the Department of Obstetrics and Gynecology of the Russian National Research Medical University named after N.I. Pirogov, CEO of the Group of Companies «Mother and Child». Perinatal medical center of the group of companies «Mother and Child». Address: 117209, Moscow, Sevastopolsky pr. 24/1. Tel.: +74957197896. E–mail: m.kurtser@mcclinics.ru
Shamanova, Maria B., Head of the Department of Miscarriage Treatment, Perinatal Medical Center Group of Companies «Mother and Child».
Address: 117209, Moscow, Sevastopolsky Avenue, 24, k1. Tel.: 8(495)3322078. E–mail: m.shamanova@mcclinics.ru
Sinitsina, Olga V., Head of the Laboratory Service of the Perinatal Medical Center Group of Companies «Mother and Child».
Address: 142081, Moscow region, Odintsovo district, 1st Uspenskoe highway, village Lapino, 111. Tel.: 8(495)5266083. E–mail: o.sinitsina@mcclinics.ru
Nikolaev, Alexander A., Head of the Clinical Diagnostic Laboratory of the Clinical Hospital Lapino Group of Companies «Mother and Child».
Address: 142081, Moscow region, Odintsovo district, 1st Uspenskoe highway, village Lapino, 111. Tel.: 8(495)5266083. E–mail: a.nicolaev@mcclinics.ru
Dedlovskaya, Anastasia I., doctor obstetrician–gynecologist, Separate structural division «Clinical Hospital IDK». Address: Samara, Volzhskoye Highway, 70.
E–mail: a.dedlovskaya@mcclinics.ru
Samsonova, Magshuka A., Clinical Resident, Perinatal Medical Center Group of Companies «Mother and Child».
Address: 117209, Moscow, Sevastopolsky Avenue, 24, k1. E–mail: ma.samsonova@mcclinics.ru

For citations: Kurtser M.A., Shamanova M.B., Sinitsina O.V., Nikolaev A.A., Dedlovskaya A.I., Samsonova M.A. Clinical rationale for determining the ratio sFlt-1/PlGF for the early detection and evaluation of the severity of preeclampsia. Akusherstvo i Ginekologiya/Obstetrics and Gynecology. 2018; (11): 114-20. (in Russian)
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2018.11.114-120

Similar Articles

By continuing to use our site, you consent to the processing of cookies that ensure the proper functioning of the site.