Growth factors as prognostic criteria for conception in IVF cycles

Niauri D.A., Gzgzyan A.M., Kogan I.Yu., Dzhemlikhanova L.Kh., Krikheli I.O., Fedorova I.D., Lesik E.A., Sharfi Yu.N., Shilnikova E.M., Selyutin A.V., Selkov S.A.

D.O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, North-Western Branch, Russian Academy of Medical Science, Saint Petersburg, Russia; Department of Obstetrics, Gynecology, and Reproductology, Saint Petersburg State University,Russia
Objective. To establish the optimal time to estimate growth factors during an IVF cycle and to determine their association with conception rate in the cycles.
Subject and methods. The present paper gives the results of a comparative analysis of the levels of the examined factors in the cervical mucus (CM) obtained on the day of transvaginal puncture (TVP) of follicles and on that of embryo transfer (ET) into the uterine cavity in 97 infertile women depending on whether pregnancy occurred as a result of IVF.
Results. There was a significant increase in the level of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) (p < 0.01) in the CM obtained on the day of TVP and on that of ET in 50 women with occurred pregnancy versus a group of women (n=47) in whom pregnancy did not. The CM levels of GM-CSF and VEGF on the day of ET were significantly associated (p < 0.05) with conception during IVF cycles and can predict it with a 69% chance.
Conclusion. The CM levels of GM-CSF and VEGF on the day of ET are the most informative indicators for assessing endometrial receptivity in the IVF cycle.

Keywords

GM-CSF
VEGF

Во многих странах мира частота бесплодия превышает критический уровень и является демографической проблемой, что, в свою очередь, стимулирует развитие методов вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) для ее преодоления. В развитых странах не менее 1% родов являются результатом программ ЭКО [1]. Однако, несмотря на совершенствование протоколов ЭКО, технических и лабораторных методов, применяемых при проведении этих программ, частота наступления беременности остается в пределах 21,0–45,8% (данные за 2009 г.) [2].

Несомненно, что качество эмбриона является основой успешной имплантации, однако наличие зрелого эндометрия также необходимо в период «окна имплантации» для совершения молекулярно-перекрестных взаимодействий между эмбрионом и эндометрием. Факторы и механизмы, приводящие к нарушению имплантации в циклах ЭКО, на сегодняшний день не до конца изучены, но именно они определяют успех ЭКО [3]. Иммунологическая теория имплантации впервые была объявлена T. egmann [4], и с тех пор роль цитокинов, факторов роста, молекул адгезии в формировании иммунной толерантности во время имплантации и на протяжении беременности активно обсуждаются в области репродуктивной иммунологии. Успешная имплантация и нормально прогрессирующая беременность во многом зависят от участия ряда цитокинов и факторов роста в процессе взаимодействия эмбриона и эндометрия. Иммуногистохимические методы позволили выявить экспрессию ряда биологически активных молекул в течение менструального цикла, и в частности, в период окна имплантации, и многие из них были предложены в качестве маркеров имплантации [5–11].

Вместе с тем поиск новых неинвазивных методов оценки имплантационной способности эндометрия является весьма актуальной задачей. Секрет эндометрия представляет среду, с которой взаимодействует эмбрион при его попадании в полость матки. Цервикальная слизь (ЦС) состоит из секрета желез эндометрия и эндоцервикса. На сегодняшний день существует небольшое количество работ, в которых авторы проводили оценку содержания цитокинов и факторов роста в ЦС во время предполагаемого окна имплантации в естественных циклах [12, 13]. В циклах ЭКО эндометрий подвергается надфизиологическим гормональным воздействиям, что, несомненно, влияет на его рецептивность [14]. В связи с чем оценка маркеров рецептивности эндометрия и определение оптимального времени получения исследуемого материала в циклах ЭКО является одной из нерешенных задач, решение которой приведет к повышению результативности циклов ЭКО. Одними из наиболее значимых факторов, участвующих в процессе имплантации, являются факторы роста, такие как гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор роста (GM-CSF), трансформирующий фактор роста-β1 (TGF-β1), сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), которые относятся к семейству секретируемых сигнальных белков, способных индуцировать пролиферацию и дифференцировку клеток.

Цель исследования: установить оптимальное время оценки факторов роста на протяжении цикла ЭКО и определить их связь с частотой наступления беременности в циклах ЭКО.

Материал и методы исследования

Обследованы 97 женщин в возрасте от 21 до 35 лет, которым было выполнено ЭКО и перенос эмбрионов (ПЭ) в полость матки на базе НИИ АГ им. Д.О. Отта СЗО РАМН с октября 2012 г. по июль 2013 г. Уровень ФСГ в крови, определенный на 3–5-й день менструального цикла у всех обследованных женщин не превышал 11 МЕ/л, при ультразвуковом исследовании определялось от 7 до 12 антральных фолликулов в максимальном эхографическом срезе яичников. Всем женщинам проводился стандартный протокол ЭКО или ЭКО с интрацитоплазматической инъекцией сперматозоидов (ИКСИ) с применением антагонистов гонадотропин-рилизинг гормона. Для поддержки лютеиновой фазы цикла применялся микронизированный прогестерон (крайнон, Serono; утрожестан, BESINSHEALTHCARE). Проводили перенос только морфологически качественных эмбрионов на четвертые или пятые сутки культивирования, оставшиеся эмбрионы были криоконсервированы методом витрификации. Беременность диагностировалась путем определения хорионического гонадотропина человека в крови на 
14-й день после переноса эмбрионов в полость матки и подтверждалась ультразвуковым исследованием на 21-й день. В зависимости от исхода лечения ретроспективно были сформированы 
2 группы. В I группу вошли 50 (51,55%) женщин с эхографически подтвержденной беременностью, II группа состояла из 47 (48,45%) женщин, у которых беременность не наступила.

Забор ЦС с использованием флоковых тампонов фирмы «Copan» (Италия) проводился дважды: в день трансвагинальной пункции (ТВП) фолликулов и в день ПЭ. Полученные образцы с примесью крови были исключены из исследования. Концентрацию VEGF, GM-CSF и TGF-β1 в цервикальной слизи проводили методом мультиплексного анализа с использованием стандартизованных коммерческих наборов «Flexset» (BD Bioscience). Полученные результаты обрабатывали с помощью компьютерной программы «CBA Array» (BD Bioscience). Для нормирования содержания исследуемых факторов в полученном материале, количество белка в анализируемой жидкости определяли фотометрически («NanoDrop 1000 Spectrophotometer»). Учитывая разные объемы полученной ЦС, содержание фактора роста в образце вычислялось с применением следующей формулы:

Статистическая обработка данных выполнена с использованием стандартного пакета Microsoft Excel и пакета прикладных программ Statistica for Windows версия 6.0, StatSoft Inc (США). Для оценки межгрупповых различий значений признаков применяли t-критерий Стьюдента и ранговый U-критерий Манна–Уитни. Статистически значимыми считались отличия при р<0,05 (95% уровень значимости). Для выявления значимых прогностических показателей, определяющих исход цикла ЭКО, была проведен пошаговый дискриминантный анализ, в состав переменных которого были включены значения GM-CSF, VEGF и TGF-β1 в ЦС.

Результаты исследования

Данные анамнеза достоверно не отличались у женщин обеих клинических групп (р>0,05). Возраст пациенток варьировал от 21 до 35 лет и в среднем составил 30,35±0,34 года. Средний индекс массы тела составил 23,65±3,53 кг/м2. Продолжительность бесплодия варьировала от 
1 до 17 лет и в среднем составила 5,93±0,37 года. Впервые лечение бесплодия с применением методов ВРТ проводилось у 49 (50,51%), повторно у 48 49,48%) женщин. Были установлены следующие факторы бесплодия: трубно-перитонеальный у 47 (48,45%) женщин, мужской у 29 (29,90%) женщин, у 43 (44,33%) женщин бесплодие было вызвано наружным генитальным эндометриозом I–II степени. Сочетание факторов бесплодия имело место у большинства – 59 женщин (60,82%). В связи с наличием мужского фактора бесплодия у 28 (56%) пациенток первой группы и у 22 (44%) второй оплодотворение было проведено методом ИКСИ. Средняя доза рекомбинантных гонадотропинов, количество полученных ооцитов и перенесенных эмбрионов не отличались в исследуемых клинических группах. Осуществлялся перенос только морфологически качественных эмбрионов. Частота имплантации составила 38,2% (68 из 178 эмбрионов). Частота наступления беременности составила 51,55% (50 женщин). У 6 женщин (12%) наступила беременность двойней. У 6 женщин (12%) была выявлена неразвивающаяся беременность на ранних сроках и лишь у одной (2%) беременность закончилась поздним самопроизвольным абортом на 22-й неделе. Беременность прогрессирует на данный момент у 19 женщин (38%) и соответствует третьему триместру. У 7 14%) женщин были преждевременные роды и у 17 (34%) – срочные.

Содержание в ЦС GM-CSF (р=0,0003), VEGF (р=0,012) и TGF-β1 (р=0,039) в день ТВП значительно превосходило соответствующие показатели, полученные в день ПЭ.

Было отмечено значительное увеличение содержания GM-CSF и VEGF (р<0,01) в ЦС в день ТВП (рис. 1а, б) и в день ПЭ (рис. 2а, б) у женщин с наступившей беременностью по сравнению с группой женщин, у которых беременность не наступила. При этом в день ТВП содержание GM-CSF в ЦС у женщин I группы варьировало от 2,09 до 303,65 пг/мл 
и в среднем составило 58,99±7,76 пг/мг. У женщин II группы его значение определялось в интервале от 2,74 до 76,89 пг/мг и в среднем составило 19,38±2,46 пг/мг. Содержание VEGF в ЦС, полученной в день ТВП, у женщин I группы было в пределах от 21,29 до 821,22 пг/мл (в среднем 182,33±21,66 пг/мг), у женщин II группы варьировало в интервале от 12,23 до 601,97 пг/мг 
(в среднем 112,36±16,82 пг/мг). В день ПЭ содержание GM-CSF в ЦС у женщин I группы варьировало от 2,97 до 134,09 пг/мл и в среднем составляло 31,49±3,66 пг/мг. У женщин II группы этот показатель изменялся в интервале от 2,74 до 76,89 пг/мг и в среднем составлял 19,39±2,46 пг/мг. Содержание VEGF в ЦС, полученной в день ПЭ у женщин I группы, в среднем составило 131,50±17,92 пг/мг 
(29,75 – 429,73 пг/мл), у женщин II группы варьировало в интервале от 12,56 до 293,29 пг/мг (в среднем 79,71±7,05 пг/мг).

Отмечена тенденция к увеличению содержания TGF-β1 в ЦС как в день ТВП, так и в день ПЭ у женщин с наступившей беременностью в результате ЭКО, однако полученные отличия не были статистически достоверными (р>0,05).

Была отмечена умеренная положительная корреляция между содержанием GM-CSF (r=0,27, р<0,05), VEGF (r=0,31, р<0,05) в ЦС и наступлением беременности в день ПЭ. Корреляционная зависимость между содержанием GM-CSF (r=0,22, р<0,05), VEGF (r=0,25, р<0,05), VEGF в ЦС и наступлением беременности в день ТВП была менее выражена. У 95% женщин беременность наступила при следующих интервалах значений определяемых факторов роста в ЦС в день ТВП: GM-CSF – от 43,39 до 
74,58 пг/мг и VEGF  от 138,79 до 225,88 пг/мг. В день ПЭ 95% эффективность соответствовала следующим интервалам значений: GM-CSF – от 24,14 до 38,84 пг/мг и VEGF – от 102,23 до 160,77 пг/мг.

Была выявлена умеренная положительная корреляционная связь между содержанием GM-CSF, VEGF и TGF-β1 в ЦС в день ТВП (r=0,50, р<0,05; r=0,38, р<0,05), а также между содержанием GM-CSF, VEGF и TGF-β1 в ЦС в день ПЭ (r=0,47, р<0,05; r=0,36, р<0,05 соответственно). Более выраженная сопряженность была отмечена в отношении содержания VEGF и GM-CSF в ЦС в день ТВП (r=0,72, р<0,05) (рис. 3).

Дискриминантный анализ, в который были включены все исследуемые факторы роста в ЦС в день ТВП и в день ПЭ, выявил, что содержание VEGF и GM-CSF в ЦС, полученные в день ПЭ, имеют наибольшее предиктивное значение в отношении наступления беременности в цикле ЭКО (69%).

Обсуждение

Считается, что дисбаланс выработки различных иммунологических факторов, в том числе цитокинов, факторов роста, хемокинов, а также их рецепторов приводит к нарушению репродуктивного процесса на любых его стадиях – фолликулогенез, овуляция, имплантация, а также на протяжении всей беременности [15, 16]. В этой связи поиск иммунологических маркеров рецептивности эндометрия и методов их определения в циклах ЭКО является актуальной задачей. Применение неинвазивных методов оценки рецептивности эндометрия в циклах ЭКО является перспективным направлением развития ВРТ, так как позволяет избежать травматизации ткани эндометрия и не создает ограничений для ПЭ [17].

Предприняты попытки получения секрета эндометрия в день ПЭ и доказано, что данная процедура не нарушает процесс имплантации [12, 18]. ЦС представляет секрет эндометрия и слизистой цервикального канала. Неоднократно было отмечено присутствие ряда цитокинов в ЦС [12, 13]. 
Так в работе C.M. Boomsma и соавт. (2009) доказано, что разные цитокины, присутствующие в смывах из полости матки в день ПЭ у женщин, участвующих в программах ЭКО, находятся также в ЦС, но в менее выраженных концентрациях [12]. Учитывая, что получение ЦС в цикле ЭКО является неинвазивной процедурой и может отражать иммунологический потенциал клеток эндометрия, определение значимости ряда факторов роста на ключевых этапах протокола ЭКО (в день ТВП и в день ПЭ) стало основной целью нашей работы.

Для более точной оценки рецептивности эндометрия мы проводили исследование содержания ряда факторов роста в ЦС у женщин с максимально унифицированными исходными условиями: все пациентки были раннего репродуктивного возраста, всем проводилось лечение бесплодия с применением одинаковых протоколов стимуляции суперовуляции, качество полученных ооцитов и перенесенных эмбрионов не отличалось, обработка полученного материала и его оценка проводились стандартным методом с использованием одной компьютерной системы подсчета данных.

Адекватная васкуляризация эндометрия необходима для совершения процесса имплантации. В этом процессе ключевая роль отводится VEGF. Считается, что именно он является основным ангиогенным фактором, регулирующим рост новых кровеносных сосудов в эндометрии человека [19–21]. Не менее важная роль принадлежит TGF-β1, который участвует в регуляции толерантности иммунной системы матери к имплантируемому эмбриону путем смещения Th1-иммунной реакции в сторону Th2, что обеспечивает иммунологически благоприятные условия для реализации процесса имплантации и прогрессирования беременности [22, 23]. Также одним из основных факторов роста стимулирующих пролиферацию и дифференцировку клеток является GM-CSF, который синтезируется клетками эндометрия, и уже с момента первого деления эмбрион экспрессирует рецепторы к этому фактору на своей поверхности [24, 25].

Доказано, что выработка многих цитокинов и факторов роста стимулируется стероидными гормонами и в большей степени хорионическим гонадотропином [26–28]. В нашей работе было выявлено, что содержание GM-CSF, VEGF и TGF-β1 в ЦС преобладало в день ТВП над их содержанием в день ПЭ (в 2 раза, 1,4 раза и 1,4 раза соответственно), что объясняется максимальными концентрациями половых стероидных гормонов в день ТВП. Содержание GM-CSF и VEGF в ЦС у женщин с наступившей беременностью в результате ЭКО было выше в день ТВП в 3,5 раза и в 1,6 раза соответственно, и в день ПЭ – в 1,6 раза и в 1,7 раза соответственно, по сравнению с женщинами, у которых беременность не наступила. Полученные результаты отражают прогностическую ценность указанных параметров и согласуются с ранее полученными выводами других авторов, которые выявили снижение уровня этих факторов у женщин с привычным невынашиванием [29, 30], идиопатическим бесплодием [31] и неудачными попытками ЭКО [32] в различном биологическом материале.

Исходя из результатов проведенного нами исследования, у женщин с наступившей после ЭКО беременностью отмечалась тенденция к увеличению содержания TGF-β1 в ЦС в день ТВП и ПЭ, однако эти различия не были статистически достоверными (р>0,05). Поэтому, на наш взгляд, оценка содержания TGF-β1 в ЦС не может являться прогностическим критерием имплантационной способности эндометрия.

В многочисленных работах показана способность TGF-βs, в том числе TGF-β1, усиливать синтез разными клетками, в том числе эпителиальными клетками эндометрия, различных молекул, участвующих в процессе имплантации, таких как факторы роста: VEGF, белок-1, связывающий инсулиноподобный фактор роста (IGFBP-1), 
металлопротеиназы (MMP-9), лейкемия-ингибирующий фактор (LIF) и снижение синтеза противовоспалительного интерлейкина (IL)-6 
[22, 23, 33, 34]. Также было показано, что TGF-βs контролируют дифференцировку T-регуляторных (Тreg) клеток, выступающих в качестве основных медиаторов иммунной толерантности во время беременности [35]. Treg-клетки в свою очередь способны контролировать силу и продолжительность иммунного ответа посредством регуляции функции Т-хелперов, которые способны синтезировать GM-CSF. Полученные нами корреляции между содержанием GM-CSF (r=0,50, р<0,05), VEGF (r=0,38, р<0,05) и TGF-β1 в ЦС в день ТВП, а также между GM-CSF (r=0,47, р<0,05), VEGF (r=0,36, р<0,05,) и TGF-β1 в ЦС в день ПЭ, вероятнее всего, свидетельствуют о способности TGF-β1 усиливать синтез VEGF, GM-CSF клетками эндометрия. Наиболее выраженная сопряженность в отношении содержания VEGF и GM-CSF в ЦС была получена в день ТВП (r=0,72, р<0,05) на пике максимального гормонального воздействия (36 после введения хорионического гонадотропина) и, вероятнее всего, свидетельствует о контролируемой выработке VEGF и GM-CSF клетками эндометрия общими паракринными факторами (TGF-β1 и др.), осуществляющими системную регуляцию процесса имплантации.

Полученные нами результаты по неинвазивному исследованию содержания VEGF, GM-CSF и TGF-β1 в ЦС подтверждают полученные ранее данные при биопсии эндометрия и отражают значительное влияние перечисленных факторов роста на процесс имплантации эмбриона в полость матки, что делает возможным применение этого метода в качестве прогностической оценки эффективности протоколов ЭКО.

В последние годы проводятся исследования по использованию рекомбинантной формы GM-CSF с целью улучшения качества эмбрионов и имплантационных свойств эндометрия в терапии пациентов с повторными неудачами ЭКО [36–38]. Однако требуются дополнительные данные рандомизированных контролируемых исследований с доказанной эффективностью для внедрения этих препаратов в широкую клиническую практику. Еще на более ранней стадии находятся разработки методов клинического применения рекомбинантных препаратов VEGF, играющего ведущую роль в ангиогенезе и являющегося важнейшим звеном процесса имплантации и дальнейшего прогрессирования беременности.

Выводы

При иммуноцитохимическом исследовании ЦС в день ТВП прогностически благоприятными в отношении наступления беременности оказались уровни GM-CSF в пределах от 43,39 до 74,58 пг/мг и значения VEGF в интервале от 138,79 до 225,88 пг/мг.

В день ПЭ содержание в ЦС GM-CSF в пределах от 24,14 до 38,84 пг/мг и VEGF в интервале от 102,23 до 160,77, также было связано с наступлением беременности.

Имеется корреляционная зависимость между содержанием GM-CSF (r=0,27, р<0,05) и VEGF (r=0,31, р<0,05) в ЦС, определяемой в день ПЭ и наступлением беременности, что позволяет прогнозировать ее наступление в цикле ЭКО в 69% случаев.

Выявленные положительные корреляционные связи между содержанием VEGF, GM-CSF и TGF-β1 в ЦС в день ТВП и в день ПЭ свидетельствует об общности механизмов паракринной регуляции процесса имплантации. Наиболее выраженная сопряженность в отношении содержания VEGF и GM-CSF в ЦС получена в день ТВП (r=0,72, р<0,05).

Изолированное определение TGF-β1 в ЦС как в день ТВП, так и в день ПЭ не отражает результативности циклов ЭКО.

References

1. Sutcliffe A.G., Ludwig M. Outcome of assisted reproduction. Lancet. 2007; 370(9584): 351-9.
2. Ferraretti A.P., Goossens V., Kupka M., Bhattacharya S., de Mouzon J., Castilla J.A. Assisted reproductive technology in Europe, 2009: results generated from European registers by ESHRE. Hum. Reprod. 2013; 28(9): 2318-31.
3. Edwards R.G. Human implantation: the last barrier in assisted reproduction technologies? Reprod. Biomed. Online. 2006; 13(6): 887-904.
4. Wegmann T.G., Lin H., Guilbert L., Mosmann T.R. Bidirectional cytokine interactions in the maternal-fetal relationship: is successful pregnancy a TH2 phenomenon? Immunol. Today. 1993; 14(7): 353-5.
5. Damario M.A., Lesnick T.G., Lessey B.A., Kowalik A., Mandelin E., Seppälä M., Rosenwaks Z. Endometrial markers of uterine receptivity utilizing the donor oocyte model. Hum. Reprod. 2001; 16(9):1893-9.
6. Díaz-Gimeno P., Horcajadas J.A., Martínez-Conejero J.A., Esteban F.J., Alamá P., Pellicer A., Simon C. A genomic diagnostic tool for human endometrial receptivity based on the transcriptomic signature. Fertil. Steril. 2011; 95(1): 50-60.
7. Quinn C.E., Casper R.F. Pinopodes: a questionable role in endometrial receptivity. Hum. Reprod. 2009; 15(2): 229-36.
8. Quinn С., Ryan Е., Claessens Е.А. The presence of pinopodes in the human endometrium does not delineate the implantation window. Fertil. Steril. 2007; 87(5): 1015-21.
9. Seo W.S., Jee B.C., Moon S.Y. Expression of endometrial protein markers in infertile women and the association with subsequent in vitro fertilization outcome. Fertil. Steril. 2011; 95(8): 2707-10.
10. Serafini P.C., Silva I.D., Smith G.D., Motta E.L., Rocha A.M., Baracat E.C. Endometrial claudin-4 and leukemia inhibitory factor are associated with assisted reproduction outcome. Reprod. Biol. Endocrinol. 2009; 7: 30.
11. Zhioua A., Elloumi H., Fourati S., Merdassi G., Ben Ammar A., Sajia B.S. et al. Morphometric analysis of the human endometrium during the implantation window. Light and transmission electron microscopy study. J. Gynecol. Obstet. Biol. Reprod. (Paris). 2012; 41(3): 235-42.
12. Boomsma C.M., Kavelaars A., Eijkemans M.J., Lentjes E.G., Fauser B.C., Heijnen C.J., Macklon N.S. Endometrial secretion analysis identifies a cytokine profile predictive of pregnancy in IVF. Hum. Reprod. 2009; 24(6): 1427-35.
13. Gargiulo A.R., Fichorova R.N., Politch J.A., Hill J.A., Anderson D.J. Detection of implantation-related cytokines in cervicovaginal secretions and peripheral blood of fertile women during ovulatory menstrual cycles. Fertil. Steril. 2004; 82(Suppl. 3): 1226-34.
14. Chen Q.J., Sun X.X., Li L., Gao X.H., Gemzell-Danielsson K., Cheng L.N. Effects of ovarian stimulation on endometrial integrin beta3 and leukemia inhibitory factor expression in the peri-implantation phase. Fertil. Steril. 2008; 89(Suppl. 5): 1357-63.
15. Bellver J., Garrido N., Remohí J., Pellicer A., Meseguer M. Influence of paternal age on assisted reproduction outcome. Reprod. Biomed. Online. 2008; 17(5): 595-604.
16. Geisler N., Schünemann J., Weber K., Häner M., Aebi U. Assembly and architecture of invertebrate cytoplasmic intermediate filaments reconcile features of vertebrate cytoplasmic and nuclear lamin-type intermediate filaments. J. Mol. Biol. 1998; 282(3): 601-17.
17. Karimzade M.A., Oskouian H., Ahmadi S., Oskouian L. Local injury to the endometrium on the day of oocyte retrieval has a negative impact on implantation in assisted reproductive cycles: a randomized controlled trial. Arch. Gynecol. Obstet. 2010; 281(3): 499-503.
18. Van der Gaast M.H., Beier-Hellwig K., Fauser B.C., Beier H.M., Macklon N.S. Endometrial secretion aspiration prior to embryo transfer does not reduce implantation rates. Reprod. Biomed. Online. 2003; 7(1): 105-9.
19. Guzeloglu-Kayisli O., Kayisli U.A., Taylor H.S. The role of growth factors and cytokines during implantation: endocrine and paracrine interactions. Semin. Reprod. Med. 2009; 27(1): 62-79.
20. Li X.F., Gregory J., Ahmed A. Immunolocalisation of vascular endothelial growth factor in human endometrium. Growth Factors. 1994; 11(4): 277-82.
21. Neufeld G., Cohen T., Gengrinovitch S., Poltorak Z. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors. FASEB J. 1999; 13(1): 9-22.
22. Mazella J., Tang M., Tseng L. Disparate effects of relaxin and TGFbeta1: relaxin increases, but TGFbeta1 inhibits, the relaxin receptor and the production of IGFBP-1 in human endometrial stromal/decidual cells. Hum. Reprod. 2004; 19(7): 1513-8.
23. Perrier d'Hauterive S., Charlet-Renard C., Dubois M., Berndt S., Goffin F., Foidart J., Geenen V. Human endometrial leukemia inhibitory factor and interleukin-6: control of secretion by transforming growth factor-beta-related members. Neuroimmunomodulation. 2005; 12(3): 157-63.
24. Jenkins B.J., Le F., Gonda T.J. A cell type-specific constitutive point mutant of the common β-subunit of the human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), interleukin (IL)-3, and IL-5 receptors requires the GM-CSF receptor α-subunit for activation. J. Biol. Chem. 1999; 274(13): 8667-77.
25. Jokhi P.P., King A., Loke Y.W. Immunology: production of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor by human trophoblast cells and by decidual large granular lymphocytes. Hum. Reprod. 1994; 9(9): 1660-9.
26. Chen F., Duan H., Zhang Y., Wu Y.H. Effect and mechanism of formation of intrauterine adhesion at different doses of oestrogen. Zhonghau Fu Chan Ke Za Zhi. 2010; 45(12): 917-20.
27. Paiva P., Hannan N.J., Hincks C., Meehan K.L., Pruysers E., Dimitriadis E., Salamonsen L.A. Human chorionic gonadotrophin regulates FGF2 and other cytokines produced by human endometrial epithelial cells, providing a mechanism for enhancing endometrial receptivity. Hum. Reprod. 2011; 26(5): 1153-62.
28. Srivastava A., Sengupta J., Kriplani A., Roy K.K., Ghosh D. Profiles of cytokines secreted by isolated human endometrial cells under the influence of chorionic gonadotropin during the window of embryo implantation. Reprod. Biol. Endocrinol. 2013; 11: 116.
29. Jasper M.J., Tremellen K.P., Robertson S.A. Reduced expression of IL-6 and IL-1α mRNAs in secretory phase endometrium of women with recurrent miscarriage. Am. J. Reprod. Immunol. 2007; 73(1): 74-84.
30. Perricone R., De Carolis C., Giacomelli R., Guarino M.D., De Sanctis G., Fontana L. GM-CSF and pregnancy: evidence of significantly reduced blood concentrations in unexplained recurrent abortion efficiently reverted by intravenous immunoglobulin treatment. Am. J. Reprod. Immunol. 2003; 50(3): 232-7.
31. Hannan N.J., Paiva P., Meehan K.L., Rombauts L.J., Gardner D.K., Salamonsen L.A. Analysis of fertility-related soluble mediators in human uterine fluid identifies VEGF as a key regulator of embryo implantation. Endocrinology. 2011; 152(12): 4948-56.
32. Spandorfer S.D., Barmat L.I., Liu H.C., Mele C., Veeck L., Rosenwaks Z. Granulocyte macrophage-colony stimulating factor production by autologous endometrial co-culture is associated with outcome for in vitro fertilization patients with a history with multiple implantation failures. Am. J. Reprod. Immunol. 1998; 40(5): 377-81.
33. Itoh H., Kishore A.H., Lindqvist A., Rogers D.E., Word R.A. Transforming growth factor β1 (TGFβ1) and progesterone regulate matrix metalloproteinases (MMP) in human endometrial stromal cells. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2012; 97(6): E888-97.
34. Yamamoto T., Kozawa O., Tanabe K., Akamatsu S., Matsuno H., Dohi S., Uematsu N. Involvement of p38 MAP kinase in TGF-β-stimulated VEGF synthesis in aortic smooth muscle cells. J. Cell. Biochem. 2001; 82(4): 591-8.
35. Jasper M.J., Tremellen K.P., Robertson S.A. Primary unexplained infertility is associated with reduced expression of the T-regulatory cell transcription factor Foxp3 in endometrial tissue. Mol. Hum. Reprod. 2006; 12(5): 301-8.
36. Agerholm I., Loft A., Hald F., Lemmen J.G., Munding B., Sørensen P.D., Ziebe S. Culture of human oocytes with granulocyte-macrophage colony-stimulating factor has no effect on embryonic chromosomal constitution. Reprod. Biomed. Online. 2010; 20(4): 477-84.
37. Würfel W. Approaches to a better implantation. J. Assist. Reprod. Genet. 2000; 17(8): 473.
38. Ziebe S., Loft A., Povlsen B.B., Erb K., Agerholm I., Aasted M.A. et al. Randomized clinical trial to evaluate the effect of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) in embryo culture medium for in vitro fertilization. Fertil. Steril. 2013; 99(6): 1600-9.

About the Authors

Niauri Dariko Aleksandrovna, MD, Professor, Head of the Department of Obstetrics, Gynecology and Reproduction, Medical Faculty, St. Petersburg State
University. 199034, Russia, St. Petersburg, Universitetskaya nab. 7-9. E-mail: office@inform.pu.ru
Gzgzyan Alexander Mkrtichevich, MD, Head of Department of Reproductive Technologies, D.O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, RAMS. 199034, Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line 3. E-mail: iagmail@ott.ru
Selkov Sergey Alekseevich, Prof., Sci.D., M.D., Head of laboratory of immunology of D.O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, RAMS. 199034, Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line 3. E-mail: selkovsa@mail.ru
Kogan Igor Yurievich, MD, department of Physiology and Pathology of neonatal,
D.O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, RAMS. 199034, Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line 3. E-mail: iagmail@ott.ru
Selutin Aleksandr Vasil’evich, PhD, senior scientist of laboratory of immunology of D.O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, RAMS. 199034, Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line 3. E-mail: a_selutin@yahoo.com
Dzhemlikhanova Liailia Kharryasovna, MD, Associate Professor of Obstetrics, Gynecology and Reproduction, Medical Faculty, St. Petersburg State University. 199034, Russia, St. Petersburg, Universitetskaya nab. 7-9. E-mail: office@inform.pu.ru
Krikheli Inna Otarovna, MD, researcher, D.O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, RAMS. 199034, Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line 3. E-mail: iagmail@ott.ru
Fedorova Irina Dmitrievna, PhD, Senior Researcher, embryologist of the Department of Reproductive Technologies, D.O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, RAMS. 199034, Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line 3. E-mail: irendf@mail.ru
Lesik Elena Aleksandrovna, PhD, Senior Researcher, embryologist, D.O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, RAMS. 199034, Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line 3. E-mail: lesike@yandex.ru
Sharfi Yulia Najibovna, PhD student of the Department of Obstetrics, Gynecology and Reproduction, Medical Faculty, St. Petersburg State University. 199034, Russia, St. Petersburg, Universitetskaya nab. 7-9. E-mail: youlia03@yandex.ru
Shilnikova Evgeniia Mihailovna, PhD student of the Department of genetics, Medical Faculty, St. Petersburg State University. 199034, Russia, St. Petersburg, Universitetskaya nab. 7-9. E-mail: shilnikova-j@mail.ru

Similar Articles

By continuing to use our site, you consent to the processing of cookies that ensure the proper functioning of the site.