Физиологическое течение беременности во многом зависит от правильного развития плаценты. Значимым элементом адекватного развития плаценты является формирование полноценной сосудистой системы, которая напрямую зависит от «удачной» инвазии трофобласта, процессов васкулогенеза и ангиогенеза [1–3].
Вышеуказанные процессы происходят под контролем ангиогенных и антиангиогенных факторов, цитокинов, хемокинов, которых на сегодняшний день выделено более 50 [2, 3]. Наиболее значимыми из ангиогенных факторов являются белки группы сосудисто-эндотелиальных факторов, в частности сосудисто-эндотелиальный (Vascular Endothelial Growth Factor – VEGF или VEGF-А) и плацентарный фактор роста (Placental Growth Factor – PlGF), которые экспрессируются клетками трофобласта, плацентарными макрофагами, эндотелиальными клетками. Активность ангиогенных факторов регулируется антиангиогенным фактором – растворимым рецептором 1 васкуло-эндотелиального фактора роста (sVEGF-R1) [4–7].
В настоящее время большое количество научных работ посвящено определению концентраций и изучению действий биологически активных веществ на начальных сроках гестации [8–10]. Однако исследования, посвященные количественному определению ангиогенных и антиангиогенных факторов на протяжении беременности, единичны, их данные противоречивы [11–13].
Целью нашего исследования было определение концентрации VEGF, PlGF и sVEGF-R1 в сыворотке крови беременных женщин при физиологическом течении гестационного периода.
Материал и методы исследования
Настоящее исследование являлось когортным проспективным, выполнялось на базе ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России с 2013 по 2015 годы.
Под наблюдением находились 114 беременных женщин. У каждой женщины за беременность проводился забор крови из периферической вены в 11–13-ю, 22–24-ю, 32–34-ю недели гестации. Проводилась оценка соматического, акушерско-гинекологического анамнеза, клиническая и лабораторная оценка здоровья беременных женщин, течения беременности, родов, послеродового периода, показателей здоровья новорожденных.
На базе центральной клинико-диагностической лаборатории ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова проводилось измерение уровней биохимических факторов. Полученные пробы периферической крови центрифугировали со скоростью 2500 об./мин.
в течение 12 минут. Сепарированные образцы сыворотки хранили в пластиковых пробирках типа «Эппендорф» до тестирования при температуре -20°С не более 6 месяцев.
Концентрации VEGF определялись методом иммуноферментного анализа ручной планшетной методикой с помощью набора Human VEGF (Quantikine ELISA, R&D Systems); концентрации PlGF и sVEGF-R1 – методом электрохемилюминисцентного иммуноанализа с использованием наборов PlGF, sVEGF-R1 (Cobas RocheDiagnostics) на анализаторе Cobos E 411 Rochе.
Математическую обработку проводили с использованием программного пакета Statistica 10 (StatSoft Inc.).
Результаты исследования
В исследование включены 114 беременных женщин. 14 женщин (1,3%) исключены из исследования в связи с началом приема препаратов прогестерона, которые в свою очередь посредством иммунологического контроля могут влиять на выработку ростовых факторов [14]. По личным причинам 8 беременных женщин (7,0%) отказались от продолжения участия в исследовании, у 4 женщин (3,5%) произошел самопроизвольный выкидыш при сроке гестации 13,1±0,4 недели.
Критерии включения: срок гестации 11–13 недель, подписание информированного согласия для участия в исследовании. Критерии исключения: осложненное течение I триместра беременности, многоплодная беременность, соматические заболевания, прием кортикостероидов, нестероидных противовоспалительных средств, препаратов прогестерона.
Закончили исследование 88 беременных женщин: 54 (61,4%) первобеременных и 34 (38,6%) повторнобеременных повторнородящих. Средний возраст составлял 29,8±3,9 года. У повторнородящих при предыдущих родах осложнений не наблюдалось. При анализе течения беременности установлено, что уровень систолического артериального давления составил 115,2±7,3 мм рт. ст., диастолического – 75,2±3,1 мм рт. ст. Общая прибавка массы тела за беременности составила 11,3±0,4 кг и носила равномерный характер. Анемия легкой степени наблюдалась у 35 беременных (39,7%), средний уровень гемоглобина 103±5,2 г/л. На протяжении беременности у всех женщин показатели биохимического анализа крови, общего анализа мочи были в пределах референсных значений.
Оценка состояния плодов по данным ультразвукового, допплерометрического и кардиотокографического исследований в декретированные сроки патологии не выявила.
Роды произошли в срок гестации 39,2±1,4 недели, у 85 (96,6%) в головном и у 3 (3,4%) – в тазовом предлежании плода. Родоразрешены через естественные родовые пути 83 женщины (94,3%). Путем операции кесарева сечения родоразрешены 5 беременных (5,7%): в связи с начавшейся гипоксией плода – 3 пациентки, в связи с вторичной слабостью родовой деятельности – 2 пациентки. Средняя продолжительность родов составила 10,1±2,2 часа, безводный промежуток – 9,3±1,3 часа. Кровопотеря в родах была физиологическая – 235,0±31,3 мл (до 0,5% массы тела). Послеродовый период протекал без осложнений. Средняя масса тела новорожденных составила 3372,3±56,5 г, длина тела – 51,5±0,3 см, оценка по шкале Апгар – 7,8±0,1 балла. У всех детей наблюдалось физиологическое течение периода новорожденности.
При оценке содержания PlGF отмечен рост концентрации с увеличением срока гестации. При этом обращает на себя внимание семикратное увеличение показателя ко II триместру беременности. Так в 11–13 недель уровень PlGF составил 51,9±7,2 пг/мл, в 24–26 недель – 369,8±34,6 пг/мл (таблица). Выявленная динамика концентрации PlGF демонстрирует его активность в процессах морфологического развития сосудов плаценты на протяжении всего периода гестации.
При оценке динамики уровня VEGF пришли к следующему заключению. Отмечен постепенный рост уровня VEGF от I триместра (7,6±0,2 пг/мл) ко II триместру (8,2±0,2 пг/мл), с последующим снижением к 32–34 неделям гестации (5,3±0,9 пг/мл) (таблица), что, вероятно, связано с активным участием в процессах васкуло- и ангиогенеза в плацентарной ткани в I и II триместрах беременности и снижением активности к III триместру.
В то же время динамика антиангиогенного фактора показала отличительную тенденцию. При сроках гестации 11–13 и 24–26 недель показатели sVEGF-R1 остаются относительно стабильными. Так, в I триместре значение составляет 1991,6±30,7 пг/мл, во II триместре беременности – 1980,7±27,7 пг/мл.
Однако к 32–34 неделям гестации отмечен рост показателя на 14%, среднее значение которого составляет 2266,5±51,3 пг/мл (таблица), что связано с физиологическим созреванием плаценты, преобладанием антиангиогенных процессов.
Обсуждение
Важным элементом правильного развития плаценты является формирование адекватной сосудистой системы, обусловливающее физиологическое течение беременности и полноценное развитие плода. Вышеуказанные процессы начинаются с первых недель гестации сначала путем васкулогенеза, а затем путем ангиогенеза.
Сосудистая сеть плаценты пластична и изменяется в течение периода гестации. Этапы развития плаценты происходят под контролем множества сигнальных молекул, в частности ростовых факторов: VEGF, PlGF. Контроль действий за ними осуществляют ингибиторы – антиангиогенные факторы, в частности sVEGF-R1.
Установлено, что основной функцией VEGF является участие в пролиферации, дифференцировке, миграции, выживаемости эндотелиальных клеток [7, 15].
Научные данные свидетельствуют о ключевой роли PlGF в регуляции эффектов VEGF. Также PlGF стимулирует рост, миграцию и выживание эндотелиальных клеток [16], вызывает расширение кровеносных сосудов и стимулирует коллатеральный рост сосудов, активирует экспрессию макрофагами провоспалительных цитохемокинов [5, 17].
Активность VEGF и PlGF регулируется sVEGF-R1, который синтезируется плацентарными макрофагами и эндотелиальными клетками. Биологическая роль заключается в регуляции биодоступности ангиогенных факторов в сыворотке крови, путем их связывания для предотвращения избыточной инвазии клеток трофобласта, чрезмерного развития сосудистой сети плаценты [3, 5].
Изменение содержания сосудистых факторов в сыворотке крови женщин на протяжении беременности отражает изменение их содержания в маточно-плацентарном комплексе. В связи с этим измерение концентрации данных факторов в материнском кровотоке важно для изучения процессов развития и функционирования плаценты.
При проведении исследования были учтены и проанализированы данные литературы, касающиеся изучению динамики ангиогенных и антиангиогенных факторов на протяжении беременности.
Полученные показатели VEGF в I триместре беременности согласуются с данными исследования М.М. Зиганшиной и соавт. [13]. В исследовании И.С. Сидоровой, Н.А. Никитиной концентрации VEGF отличны от полученных данных в десятки раз, что можно связать с применением различных тест-систем [12].
Значения концентрации PlGF аналогичны с рядом авторов, сообщающих об увеличении концентрации до 34 недели гестации [11, 18, 19]. В то же время в ряде исследований отмечено увеличение концентрации PlGF от I ко II триместру, максимальные значения которого приходятся на 28–30 недель гестации [5, 9, 10]. По результатам проведенного нами исследования значения PlGF возрастают до 32–34 недель. Отличия можно связать с разными «точками» сравнения. Концентрации PlGF, полученные в работе J. Schiettecatte [20], разнятся с полученными данными: в I и II триместрах – достоверно ниже (р<0,05), в III триместре достоверно выше (р<0,01).
Полученная динамика значений sVEGF-R1 аналогична с данными ряда исследований [10, 11, 20].
Однако в работе И.С. Сидоровой [12] отмечен достоверный рост до 14 недель гестации, далее по мере прогрессирования беременности изменение концентрации было не достоверно и составляло 1798±52 пг/мл.
Выводы
- Проведенное исследование наглядно демонстрирует закономерность, отражающую максимальную концентрацию PlGF на сроке 32–34 недели, которая постепенно повышается начиная с I триместра.
- Концентрация VEGF незначительно повышается ко II триместру и заметно снижается к III триместру.
- sVEGF-R1 имеет обратно пропорциональную корреляцию с VEGF во II триместре и стремительно растет к 32–34 неделям.
- Полученные результаты демонстрируют процесс физиологического ангиогенеза, а исследование, использованное в нашей описательной работе, следует рассмотреть как диагностическую процедуру при обследовании женщин из группы риска по развитию сосудистых осложнений.
