Role of aromatase gene (CYP 19) polymorphism in the development of infertility in obese males

Faizullin L.Z., Tazhetdinov O.Kh., Karnaukhov V.N., Ovchinnikov R.I., Popova A.Yu., Nikitin P.D., Gamidov S.I., Trofimov D.Yu.

Academician V.I. Kulakov Research Center of Obstetrics, Gynecology, and Perinatology, Ministry of Health of Russia, Moscow; Department of Urology, N.I. Pirogov National Research Medical University, Ministry of Health of Russia, Moscow
Objective. To study a relationship of aromatase gene (CYP 19) polymorphism to infertility, spermogram readings, and blood gonadotropic hormone levels in males with obesity.
Subject and methods. The study included 75 males with a BMI of more than 30 kg/m2: a study group consisted of 50 patients with idiopathic pathozoospermia; a control group comprised 35 fertile males. Aromatase gene (CYP) polymorphism was determined by polymerase chain reaction.
Results. The obese males showed an association of fertility with their genotype containing of the A allele of rs749292(A/G) and rs2414096(A/G) polymorphisms in the CYP19A1 gene. The risk of infertility in these males increased rises by almost 2 times. Estimation of spermogram readings in patients with the homozygous form of rs2414096 and rs749292 polymorphisms (AA genotype) showed a considerable elevation in the ejaculate concentration of spermatozoa and their less mobility. The patients with the AA genotype by both polymorphisms had significantly lower levels of luteinizing hormone, follicle-stimulating hormone, and testosterone and a higher concentration of estrogen than those with the AG and GG genotypes. There were no differences in the alleles of rs936396 (C/T) polymorphism between both groups.
Conclusion. The obese males exhibited an association of fertility with rs749292(A/G) and rs2414096(A/G) polymorphisms in the aromatase gene (CYP19A1).

Keywords

male infertility
obesity
aromatase
CYP19A1 polymorphisms

Ожирение – мультифакториальное заболевание, при котором страдают и снижаются многие функции мужского организма, в том числе и репродуктивная. Исследования, проведенные в нескольких популяциях, показали, что у мужчин с ожирением риск бесплодия более чем на 50% выше, чем при нормальном весе [1]. При избыточном весе ухудшаются как количественные, так и качественные параметры спермограммы, чаще выявляются олиго- и азооспермия [2].

Этиология и патогенез нарушения репродуктивной функции при ожирении до конца не ясны, однако в ряде работ была выявлена связь с изменением гормонального баланса: снижение уровня тестостерона и повышение продукции эстрогенов, изменения в гипоталамо-гипофизарно-гонадной оси [3]. Ключевая роль в регуляции этих гормонов принадлежит ферменту ароматазе, осуществляющему превращение андростенедиона в эстрон и тестостерона в эстрадиол [4]. Синтез фермента кодируется геном CYP19A1, локализованным на длинном плече 15-й хромосомы в позиции 15Q21.1, состоит из 10 экзонов и имеет протяженный регуляторный участок, содержащий 10 промоторов, обеспечивающих тканеспецифичность фермента [5].

Известны полиморфные варианты гена CYP19A1 (полиморфизмы), влияющие на уровень экспрессии и активности фермента, что в свою очередь выражается изменением соотношения андрогенов и эстрогенов в организме [6]. Почти все исследования связи полиморфизмов гена CYP19A с уровнем репродуктивных гормонов были проведены на популяции женщин. В отношении мужчин на сегодняшний день показано наличие ассоциации качества сперматозоидов с длиной повтора ТТТА в 4-м интроне гена CYP19A1 [7]. Мужчины с более длинными повторами характеризовались более низким соотношением андрогенов к эстрогенам, что в свою очередь, коррелировало со снижением концентрации и подвижности сперматозоидов. Повышенный уровень эстрогенов был выявлен также у мужчин с минорным аллелем полиморфизма rs700518 (А) [8].

Целью настоящей работы было сравнить частоту полиморфизмов rs2414096 (A/G), rs749292 (A/G) и rs936306 (C/T) гена ароматазы (CYP19) у бесплодных и фертильных мужчин, страдающих ожирением.

Материалы и методы

Для определения роли полиморфизмов гена ароматазы CYP19A1 в развитии бесплодия у мужчин с ожирением были обследованы 85 мужчин европеоидной расы с ожирением (ИМТ более 30 кг/м²), которые были разделены на две группы: в основную группу были включены 50 мужчин с идиопатической патозооспермией, в контрольную группу были включены 35 фертильных пациентов.

Средний возраст больных в группах не имел достоверных различий и составил 33,1±0,8 года в основной группе и 31,2±0,8 года в контрольной (p>0,05). При анализе показателя индекса массы тела группы достоверно не различались – 33,2±0,7 и 31,3±0,6 соответственно (p>0,05).

Анализ результатов по количеству курящих пациентов, длительности курения и количеству выкуриваемых сигарет в день, частоте употребления алкоголя между изучаемыми группами не выявил статистически значимых различий.

Для молекулярно-генетических исследований использовали периферическую кровь, собранную в пробирки с ЭДТА. ДНК выделяли из 100 мкл крови с использованием комплекта реагентов для выделения ДНК «Проба-ГС» (ДНК-технология, Россия). Определение полиморфизма гена ароматазы (CYP19) проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием флуоресцентно меченного олигонуклеотидного зонда и анализа кривой плавления [9]. Полимеразную цепную реакцию и определение температуры плавления олигонуклеотидных проб проводили с использованием праймеров, наборов реактивов и детектирующего амплификатора ДТ-96, разработанных в ООО «НПО ДНК-Технология», Россия.

Статистическая обработка данных выполнена на индивидуальном компьютере с помощью электронных таблиц Microsoft Excel и пакета прикладных программ Statistica for Windows@ v. 8.0, StatSoft Inc. (CША). Для оценки влияния генотипов на МПК использовали метод χ2 и вычисляли отношения шансов. Достоверность различия между сравниваемыми группами оценивали по методу Манна–Уитни для непараметрических данных.

Результаты собственных исследований

Данные, представленные на рис. 1, указывают на наличие ассоциации бесплодия у полных мужчин с присутствием в геноме аллеля А полиморфизма rs2414096. Встречаемость аллеля А у бесплодных мужчин составила 60% по сравнению с 42,9% в контрольной группе (р=0,03).У них также почти в 2 раза чаще, чем у фертильных мужчин, выявляется носительство гомозиготного генотипа АА. Риск развития бесплодия (OR) у полных мужчина при наличии аллеля А составил 2,0 (95% ДИ: 1,1–3,7).

Аналогичная ассоциация была обнаружена также для полиморфизма rs749292 (рис. 2). У бесплодных полных мужчин гомозиготный генотип АА встречался в 1,7 раз чаще, чем у полных фертильных мужчин (38,0 и 22,9%, соответственно). Риск развития бесплодия при наличии аллеля А полиморфизма rs749292 составил 1,92 (95% ДИ: 1,04–3,55).

Частота аллелей С и Т полиморфизма rs936306 в двух исследуемых группах была практически одинаковой: 81,4 и 18,6% соответственно, у фертильных полных мужчин и 83,0 и 17,3% у бесплодных (рис. 3).

В табл. 1 и 3 приведены результаты исследования гормонов в крови в зависимости от генотипа по полиморфизмам rs749292 и rs749292 у бесплодных мужчин с ожирением. Оба полиморфизма практически одинаково влияли на уровень исследованных гормонов – у носителей генотипа АА был значительно повышен в крови уровень эстрадиола, но снижена концентрация тестостерона, лютинизирующего и фолликулостимулирующего гормонов.

Результаты исследования качества спермы у бесплодных мужчин с ожирением в зависимости от генотипа приведены в табл. 2 и 4. В отношении обоих полиморфизмов, rs749292 и rs749292, генотип АА ассоциировался с более низкой концентрацией сперматозоидов в эякуляте, с меньшей их подвижностью.

Обсуждение

До недавнего времени считалось, что эстрогены являются чисто женскими половыми гомонами. Однако имеются убедительные доказательства присутствия эстрогенов и в мужских гонадах [10]. У мужчин эстрогены были выявлены как в клетках Лейдига, так и в сперматоцитах и сперматозоидах [11]. Баланс между андрогенами и эстрогенами играет важную роль для нормального развития репродуктивной системы обоих полов. Ключевая роль в обеспечении этого баланса принадлежите Р450 ароматазе, обеспечивающей превращение части андрогенов в эстрогены. Генетические полиморфизмы кодирующего ароматазу гена CYP19A1 и влияющие на ферментативную активность могут приводить к частичному или полному нарушению репродуктивной функции у обоих полов [11, 12].

В проведенном нами исследовании была выявлена значительная ассоциация бесплодия у мужчин с ожирением с присутствием в их генотипе аллеля А полиморфизмов rs749292 и rs2414096 гена CYP19A1. Риск развития бесплодия у таких мужчин повышался почти в 2 раза. При оценке показателей спермограммы у пациентов с гомозиготной формой полиморфизмов rs2414096 и rs749292 (генотип АА) отмечалось значительное снижение концентрации сперматозоидов в эякуляте и меньшей их подвижностью.

У пациентов с генотипом АА по обоим полиморфизмам уровень ЛГ, ФСГ и тестостерона достоверно ниже, а уровень эстрогена выше, чем у мужчин с генотипами AG и GG. Повышение уровня эстрадиола, сопровождающееся снижением в крови концентрации гонадотропных гормонов, уменьшает выработку тестостерона клетками Лейдига и приводит к нарушению сперматогенеза. Кроме того, эти результаты указывают на то, что замена аденина на гуанин в полиморфных участках rs2414096 и rs749292 приводит к синтезу ароматазы с повышенной ферментативной активностью, сопровождающейся более активной ароматизацией тестостерона в эстрадиол. Ранее аналогичная связь аллеля А этих же полиморфизмов с повышенной активностью ароматазы была выявлена и у женщин [12].

References

  1. Du Plessis S.S., Cabler S., McAlister D.A., Sabanegh E., Agarwal A. The effect of obesity on sperm disorders and male infertility. Nat. Rev. Urol. 2010;7(3): 153-61.
  2. Sermondade N., Faure C., Fezeu L., Lévy R., Czernichow S.; Obesity-Fertility Collaborative Group. Obesity and increased risk for oligozoospermia and azoospermia. Arch. Intern. Med. 2012;172(5): 440-2.
  3. Hammoud A.O., Carrell D.T., Gibson M., Peterson C.M., Meikle A.W. Updates on the relation of weight excess and reproductive function in men: sleep apnea as a new area of interest. Asian J. Androl. 2012;14(1): 77-81.
  4. Carreau S., Lambard S., Delalande C., Denis-Galeraud I., Bilinska B., Bourguiba S. Aromatase expression and role of estrogens in male gonad : a review. Reprod. Biol. Endocrinol. 2003; 1: 35.
  5. Sebastian S., Bulun S.E. A highly complex organization of the regulatory region of the human CYP19 (aromatase) gene revealed by the Human Genome Project. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2001; 86(10): 4600–2.
  6. Olson S.H., Bandera E.V., Orlow I. Variants in estrogen biosynthesis genes, sex steroid hormone levels, and endometrial cancer: a HuGE review. Am. J. Epidemiol. 2007;165(3): 235-45.
  7. Lazaros L., Xita N., Kaponis A., Hatzi E., Plachouras N., Sofikitis N. et al. The association of aromatase (CYP19) gene variants with sperm concentration and motility. Asian J. Androl. 2011;13(2): 292-7.
  8. Bayer J., Rune G., Kutsche K., Schwarze U., Kalisch R., Büchel C., Sommer T. Estrogen and the male hippocampus: Genetic variation in the aromatase gene predicting serum estrogen is associated with hippocampal gray matter volume in men. Hippocampus. 2013; 23(2): 117-21.
  9. Kofiadi I.A., Rebrikov D.V. Metody detekcii odnonukleotidnyh polimorfizmov: allel'-specifichnaja PCR i gibridizacija s oligonukleotidnoj proboj. Genetika. 2006; 42(1): 22-32.
  10. Carreau S., Bouraima-Lelong H., Delalande C. Estrogen, a female hormone involved in spermatogenesis. Adv. Med. Sci. 2012; 57(1): 31-6.
  11. Carreau S., Wolczynski S., Galeraud-Denis I. Aromatase, oestrogens and human male reproduction. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2010; 365(1546): 1571-9.
  12. Sowers M.R., Wilson A.L., Kardia S.R., Chu J., Ferrell R. Aromatase gene (CYP 19) polymorphisms and endogenous androgen concentrations in a multiracial/multiethnic, multisite study of women at midlife. Am. J. Med. 2006; 119(9, Suppl. 1): S23-30.

About the Authors

Faizullin Leonid Z., candidate of biology, leading researcher, Federal State Budget Institution "Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology" Ministry of Healthcare of Russia, Moscow, 117997, akademik Oparin str.4, +7 916 710 6789, l_faizullin@oparina4.ru
Tagetdinov Oleg H., aspirant, Pirogov Russian National Research Medical University, Ostrovitianov str. 1, Moscow, Russia, 117997, gelotazh2007@rambler.ru
Karnauhov Vitalij N., junior researcher, Federal State Budget Institution "Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology" Ministry of Healthcare of Russia, Moscow, 117997, akademik Oparin str.4, +7 9162134926
Ovchinnikov Ruslan I., candidat of medicine, Federal State Budget Institution "Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology" Ministry of Healthcare of Russia, Moscow, 117997, akademik Oparin str.4, +7 495 995 3040
Popova Alina U., candidat of medicine, Federal State Budget Institution "Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology" Ministry of Healthcare of Russia, Moscow, 117997, akademik Oparin str.4, +7 495 978 1208, a_popova@oparina4.ru
Nikitin Pavel D., aspirant, Pirogov Russian National Research Medical University, Ostrovitianov str. 1, Moscow, Russia, 117997.
Gamidov Safail I., doctor of medicine, Federal State Budget Institution "Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology" Ministry of Healthcare of Russia, Moscow, 117997, akademik Oparin str.4, +7 495 777 3828, s_gamidov@oparina4.ru.
Trofimov Dmitrij U., doctor of biology, Federal State Budget Institution "Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology" Ministry of Healthcare of Russia, Moscow, 117997, akademik Oparin str.4, +7 916 614 9226, d_trofimov@oparina4.ru

Similar Articles

By continuing to use our site, you consent to the processing of cookies that ensure the proper functioning of the site.