Endometrial hyperplastic processes at different ages: study of cytokine status and sFas ligand levels

Lysenko O.V., Zanko S.N.

Vitebsk State Medical University
Objective. To study the local and systemic levels of cytokines and sFas ligand in endometrial hyperplastic processes and polyps at reproductive and premenopausal ages.
Subjects and methods. One hundred and thirty-one women were examined. The patients were divided into 6 groups according to their age and histological findings. The patients’ uterine cavity aspiration specimens and sera were used to measure the concentrations of interleukin-2, intereukin-4, tumor necrosis factor-α, and sFas ligand by solid-phase enzyme immunoassay. A p value < 0.05 was regarded as significant.
Results. Significant differences were found in the concentrations of cytokines and sFas ligand in the uterine aspiration specimens from the patients with endometrial hyperplasia and polyps versus the controls of reproductive and premenopausal ages. All the groups showed significant differences in the uterine aspiration specimens and serum concentrations of cytokines and sFas ligand. Their concentrations were significantly higher in the uterine cavity aspiration specimens than those in the sera. There were no differences in the serum levels of cytokines and sFas in all the groups.
Conclusion. Prior inflammatory diseases, intrauterine interventions, or intrauterine contraception may be a cause of local immunity dysfunction and Fas-dependent apoptosis in endometrial pathology. The determination of cytokines and sFas ligand in the uterine cavity aspiration specimens may be a useful diagnostic marker of endometrial hyperplasia and polyps.

Keywords

endometrium
hyperplasia
polyp
cytokines

Гиперпластические процессы (ГПЭ) и полипы (ПЭ) эндометрия являются актуальной проблемой современной гинекологии [2, 8, 9], это обусловлено в первую очередь их распространенностью. Как возможная основа для формирования рака эндометрия они также представляют важнейшую медико-социальную проблему [11, 12, 15].

Наряду с эстрогенами в развитии ГПЭ принимают участие различные биологически активные соединения, а также система клеточного и гуморального иммунитета [17]. Сюда относят цитокины, являющиеся сигнальными полипептидными молекулами иммунной системы. Они не только определяют адекватный уровень иммунореактивности, но также регулируют взаимодействия главных биологических интегративных систем организма – нервной, иммунной и эндокринной [5, 14]. В последнее десятилетие много работ посвящено изучению дисфункции иммунореактивности при патологических состояниях разного генеза. При воздействии на организм различных внешних и внутренних повреждающих факторов (стресс, инфекция, травма) может развиться вторичная
иммунная недостаточность. Изменения в системах иммунореактивности сопутствуют процессам биологической перестройки организма, таким как старение и малигнизация. Наследственная предрасположенность может спровоцировать иммунную недостаточность даже при воздействии незначительных повреждающих факторов. Отсутствие необходимого для адекватных проявлений иммунореактивности количества или функциональная несостоятельность клеток лежит в основе большинства проявлений вторичной иммунной недостаточности [1,18]. Вследствие этого субпопуляция клеток сокращается путем активации апоптоза, который также активно изучается в последнее время [10, 13, 16]. А при непосредственном воздействии повреждающего фактора индуцируется некроз клеток. К факторам, провоцирующим функ циональную клеточную анергию, можно отнести молекулы, участвующие в нормальной регуляции функции различных биологических систем: циклические нуклеотиды, медиаторы воспаления, цитокины, клеточные супрессорные факторы и факторы, блокирующие опухоли. Индуктором клеточной анергии становится продукция этих молекул выше физиологической нормы [1, 18].

Целью настоящего исследования явилось изучение содержания цитокинов и sFas-лиганда на местном и системном уровнях при ГПЭ и ПЭ в репродуктивном и пременопаузальном возрастных периодах.

Материал и методы иследованияŠ „ ‰

Обследована 131 женщина, поступившая в гинекологическое отделение для раздельного диагностического выскабливания под контролем гистероскопии в плановом порядке с подозрением
на гиперплазию или полипоз эндометрия по данным трансвагинального ультразвукового исследования или по экстренным показаниям с обильными кровянистыми выделениями из половых путей. Перед проведением раздельного диагностического выскабливания до расширения цервикального канала с помощью аспирационных зондов «Юнона» (Витебск – Санкт-Петербург) произведен забор аспиратов из полости матки для определения в аспирационном содержимом интерлейкина-2 (ИЛ-2), интерлейкина-4 (ИЛ-4), фактора некроза опухолей α (ФНО-α) и sFas-лиганда. Эти показатели определяли также в сыворотке крови пациенток, для чего брали пробы венозной крови из локтевой вены.

Содержание ИЛ-2, ИЛ-4 и ФНО-α определяли твердофазным иммуноферментным методом с использованием наборов по прилагаемым методикам (ООО «Цитокин», Санкт-Петербург). Определение sFas-лиганда проводили по общепринятой методике, основанной на методе твердофазного иммуноферментного анализа, с помощью наборов реагентов производства Beckman Coulter (США). Для расчета концентраций ИЛ-2, ИЛ-4, ФНО-α и sFas-лиганда использовали пакет Statgraphics Plus 5.0, адаптированный для медико-биологических исследований.

После гистологического исследования ткани эндометрия, полученной при раздельном диагностическом выскабливании, пациентки были разделены на 6 групп. 1-ю группу составили 36 женщин репродуктивного возраста с простой гиперплазией эндометрия без цитологической атипии, 2-ю
группу–22 пациентки репродуктивного возраста с железистыми ПЭ , 3-ю группу –20 женщин пременопаузального возраста с простой гиперплазией эндометрия без цитологической атипии, 4-ю
группу – 11 пациенток пременопаузального возраста с железистыми ПЭ. 1-ю контрольную группу
составили 23 женщины репродуктивного возраста с пролиферативным эндометрием без сопутствующей гинекологической патологии, 2-ю контрольную группу –19 женщин пременопаузального возраста с пролиферативным эндометрием без сопутствующей гинекологической патологии.

В дальнейшем группы сравнивали в пределах возрастного периода (1-я и 1-я контрольная, 2-я и 1-я контрольная, 3-я и 2-я контрольная, 4-я и 2-я контрольная), а также между возрастными категориями (1-я и 3-я, 2-я и 4-я, 1-я контрольная и 2-я контрольная).

Для статистической обработки данных приме няли прикладной программный пакет Statistica 6.0 (StatSoft, Ink. 1994-2001), адаптированный для медико-биологических исследований. Интерпретация полученных результатов осуществлялась путем определения их статистической значимости. Использовали параметрические и непараметрические методы анализа. Проверка нормальности распределения количественных признаков осуществлялась с использованием критерия Колмогорова–Смирнова. При использовании описательной статистики определяли выборочное среднее (Mean–М); среднее квадратическое отклонение (SD); медиану (Ме), 25-й квартиль (25), 75-й квартиль (75). При
сравнительном анализе рядов переменных, выраженных в интервальных шкалах, имеющих нормальное распределение, использовали t-тест для независимых выборок (t-критерий Стьюдента). При сравнительном анализе рядов переменных, выраженных в интервальных шкалах, не имеющих нормального распределения, использовали U-тест Манна–Уитни (U-критерий значимости Манна–
Уитни). Во всех случаях критическое значение уровня достоверности принималось р<0,05.

Результаты исследования и обсуждени冋 ‰ Œ

Средний возраст пациенток 1-й группы составил 38,7±4,5 года, 2-й – 38,1±5,1 года, 1-й контрольной – 39,4±5,0 года. Таким образом, эти группы сопоставимы по возрасту. Средний возраст пациенток 3-й группы составил 50,5±2,9 года, 4-й – 48,1±2,4 года, 2-й контрольной – 49,4±2,4 года. Таким образом, эти группы также сопоставимы по возрасту.

У всех пациенток перед проведением гистероскопии и раздельного диагностического выскабливания не выявлено острых или обострения хро нических экстрагенитальных заболеваний, а все данные рутинного клинико-лабораторного обследования согласно стандартным протоколам находились в пределах референтных значений.

Анализируя гинекологическую заболеваемость (табл. 1), мы выявили, что такие нозологичес-кие формы, как аднексит, заболевания шейки матки, бесплодие, встречались в анамнезе во всех
6 группах.

Таблица 1. Гинекологическая заболеваемость, перенесенные операции, внутриматочные вмешательства у обследованных женщин (в %).

Аднексит чаще обнаруживали у женщин 4-й группы. Причем при ГПЭ в репродуктивном возрасте эта нозологическая единица встречалась в 2,1 раза чаще, при ПЭ в репродуктивном возрасте – в 1,8 раза чаще, при ГПЭ в пременопаузальном периоде – в 2,4 раза чаще, при ПЭ в пременопаузальном возрасте – в 2,6 раза чаще, чем у практически здоровых женщин в пределах возрастной группы.

Заболевания шейки матки (эрозия, дисплазия, цервицит) чаще отмечались у пациенток с ПЭ в репродуктивном периоде. При сравнении с практически здоровыми женщинами в пределах возрастной группы заболевания шейки матки зарегистрированы в 1,6 раза чаще при ГПЭ в репродуктивном возрасте, в 2,2 раза чаще при ПЭ в репродуктивном возрасте, в 1,5 раза чаще при ГПЭ в пременопаузальном возрасте, в 1,7 раза чаще при ПЭ в пременопаузальном периоде. Электрохирургические методы лечения заболевания шейки матки также чаще всего применялись в группе пациенток репродуктивного возраста с ПЭ.

Бесплодие (первичное и вторичное) наблюдалось в 2,2 раза чаще у пациенток с ГПЭ и в 2,1 раза чаще
у пациенток с ПЭ детородного возраста по сравнению с 1-й контрольной группой. Причем у практически здоровых пациенток с ГПЭ в репродуктивном возрасте, в 1,7 раза чаще – с ПЭ в репродуктивном возрасте, в 2,3 раза чаще – с ГПЭ в пременопаузальном периоде, в 2,5 раза чаще – с ПЭ в пременопаузальном возрасте, чем у здоровых женщин в пределах возрастной группы.

Ручное обследование матки по поводу задержки частей последа или кровотечения в раннем послеродовом периоде зарегистрировано во всех исследуемых группах, у здоровых пациенток репродуктивного периода не производилось. В пременопаузальном возрасте ручное обследование
матки встречалось в 2,8 раза чаще при ГПЭ и в 3,4 раза чаще при ПЭ по сравнению с практически здоровыми женщинами пременопаузального возраста.

К контрацепции с помощью внутриматочного средства (ВМС) в 1,9 раза чаще прибегали женщины репродуктивного возраста с ГПЭ, в 2,1 раза чаще – репродуктивного возраста с ПЭ, в 1,9 раза чаще – пременопаузального возраста с ГПЭ, в 1,7 раза чаще – перименопаузального возраста с ПЭ по сравнению с практически здоровыми женщинами в пределах возрастной группы.

Вышеуказанные заболевания, внутриматочные вмешательства, использование внутриматочной контрацепции способствуют развитию воспаления слизистой матки [4, 7]. Учитывая, что воспалительные заболевания, внутриматочные вмешательства чаще встречаются у пациенток с фоновыми заболеваниями эндометрия, нельзя игнорировать их роль в генезе ГПЭ и ПЭ. Этот тезис
подтверждается разными исследователями [1]. Обширная травма и раневая поверхность эндометрия могут приводить к ослаблению местных защитных факторов, в том числе местной иммунной системы [5]. В последнее время многие исследователи уделяют огромное внимание изучению локальных подсистем иммунитета, а имеющаяся информация о функционировании и регуляции местной иммунной системы слизистых гениталий в норме и при патологии, ее участии и роли в механизмах резистентности, активации инфекционного процесса, саногенеза, повреждения и репарации тканей разноречива. Поэтому для изучения роли возможной дисфункции местного иммунитета мы определяли концентрации ИЛ-2, ИЛ-4, ФНО-α в аспиратах из полости матки женщин репродуктивного и перименопаузального возраста. Для оценки их роли на системном уровне определяли содержание ИЛ-2, ИЛ-4, ФНО-α в сыворотке крови обследованных пациенток. С целью изучения некоторых параметров Fas-опосредованного апоптоза определяли концентрацию sFas-лиганда в аспиратах из полости матки и сыворотке крови обследованных женщин (табл. 2).

Таблица 2. Концентрации цитокинов и sFas-лиганда в аспиратах из полости матки и сыворотке крови.

Из табл. 2 видно, что у женщин репродуктивного возраста с ГПЭ (1-я группа) и ПЭ (2-я группа) отмечается достоверное снижение концентрации в аспирате из полости матки sFas-лиганда по сравнению с таковой у пациенток 1-й контрольной группы (практически здоровые женщины репродуктивного возраста). Эти данные позволяют нам говорить о том, что в детородном возрасте при ГПЭ и ПЭ происходит снижение способности к Fas-зависимому апоптозу, который активируется при
взаимодействии Fas-рецептора с Fas-лигандом.

У пациенток репродуктивного возраста с ГПЭ и ПЭ (1-я и 2-я группы соответственно) концентрации ИЛ-2 и ИЛ-4 в аспиратах из полости матки достоверно повышены по сравнению с аналогичными показателями в 1-й контрольной группе. Концентрация ФНО-α в аспиратах из полости матки у женщин детородного возраста достоверно снижена при ГПЭ и повышена при ПЭ по сравнению с таковой у практически здоровых женщин этой возрастной группы.

В пременопаузальном периоде отмечается такая же тенденция относительно sFas-лиганда, концентрация которого в 3-й (женщины пременопаузального возраста с ГПЭ) и 4-й (женщины перименопаузального возраста с ПЭ) группах достоверно ниже, чем во 2-й контрольной группе (практически здоровые женщины пременопаузального возраста).

В пременопаузальном периоде, в отличие от детородного, концентрация ИЛ-2 в аспиратах из полости матки как при ГПЭ, так и при ПЭ достоверно ниже, чем в контрольной группе этого возрастного периода.

Относительно ИЛ-4 в пременопаузальном возрасте отмечается такая же тенденция, как и в детородном, – концентрация его достоверно повышена при ГПЭ и ПЭ по сравнению с таковой в контрольной группе в пределах своей возрастной категории.

В отличие от женщин с ГПЭ репродуктивного возраста у обследованных пременопаузального возраста концентрация ФНО-α в аспиратах из полости матки достоверно выше, чем у пациенток 2-й контрольной группы. В то время как при ПЭ в пременопаузальном возрасте отмечается такая же тенденция, как и в репродуктивном, – концентрация ФНО-α достоверно повышена по сравнению с таковой в контрольной группе в пределах возрастной категории.

Мы также сравнили все исследуемые показатели между 1-й и 3-й, а также между 2-й и 4-й группой, чтобы выяснить наличие возможных различий секреции цитокинов и sFas-лиганда при ГПЭ и ПЭ в репродуктивном и пременопаузальном возрасте.

Мы не нашли достоверных различий концентраций в аспиратах из полости матки sFas-лиганда и ИЛ-4 как при ГПЭ, так и при ПЭ между пациентками детородного и пременопаузального возраста.

В то время как концентрация ИЛ-2 в аспиратах из полости матки достоверно снижена в пременопаузальном возрасте в сравнении с детородным при ГПЭ и ПЭ, концентрация ФНО-α при ГПЭ
и ПЭ в аспиратах из полости матки у женщин пременопаузального возраста достоверно выше, чем у пациенток репродуктивного возраста.

Нами выявлены статистически значимые отрицательные корреляционные взаимосвязи между концентрацией ИЛ-2 в аспирате из полости матки при гиперплазии (R=-0,6) и полипах (R=-0,7) эндометрия в группах женщин детородного и пременопаузального возраста.

Статистически значимые положительные корреляционные взаимосвязи обнаружены между концентрацией ФНО-α в аспирате из полости матки при ГПЭ (R=0,6) и ПЭ (R=0,4) в группах женщин детородного и пременопаузального возраста.

Во всех случаях при ГПЭ и ПЭ наблюдаются выраженные дисфункциональные изменения местной иммунной системы слизистой оболочки матки. Полученные результаты говорят в большей степени об угнетении Тh1-звена цитокинов и активации Тh2-звена при фоновых заболеваниях эндометрия, что наиболее четко выражено при ГПЭ в детородном возрасте, а также при ГПЭ и ПЭ в пременопаузальном возрасте.

Мы сравнили концентрации исследуемых нами показателей в сыворотке крови и аспиратах из полости матки. Из приведенных данных видно, что содержание ИЛ-2, ИЛ-4, ФНО-α и sFas-лиганда в сыворотке крови достоверно снижено в сравнении с их концентрацией в аспиратах из полости матки как в репродуктивном, так и в пременопаузальном возрасте.

Представляет интерес тот факт, что мы не нашли статистически значимых различий между всеми исследуемыми и контрольными группами в обоих возрастных периодах относительно концентраций ИЛ-2, ИЛ-4, ФНО-α и sFas-лиганда в сыворотке крови. Исключение составили пациентки пременопаузального возраста с ГПЭ (4-я группа) только по одному показателю: содержание ИЛ-2 в сыворотке крови достоверно снижено относительно концентрации ИЛ-2 в сыворотке крови женщин 2-й контрольной группы.

Приведенные данные позволяют нам говорить о том, что изменения при ГПЭ и ПЭ происходят на локальном уровне. А по содержанию цитокинов и sFas-лиганда в сыворотке крови нельзя судить о дисфункции цитокинового звена иммунитета и Fas-зависимого апоптоза при данных патологических состояниях.

Таким образом, в анамнезе женщин репродуктивного и пременопаузального возраста с гиперпластическими процессами и полипами эндометрия чаще регистрируются воспалительные заболевания, внутриматочные вмешательства, использование внутриматочной контрацепции, что, с нашей точки зрения, является причиной найденной дисфункции местного иммунитета и Fas-зависимого апоптоза.

Концентрация цитокинов и sFas-лиганда на локальном уровне отличается от концентрации цитокинов и sFas-лиганда в циркулирующей крови, их уровень повышается в аспирате из полости матки по сравнению с таковым в сыворотке крови во много раз. Кроме того, концентрация ИЛ-2, ИЛ-4, ФНО-α и sFas-лиганда в сыворотке крови достоверно не различается как в норме, так и при фоновых заболеваниях эндометрия. Поэтому определение цитокинов sFas-лиганда в аспирате из полости матки может стать значимым прогностическим признаком гиперпластических процессов и полипов эндометрия.

Состояние местного иммунитета при фоновых заболеваниях эндометрия требует дальнейшего изучения, поскольку успех лечения и профилактики рецидивов заболевания во многом зависит
от прогресса в познании патогенеза этой патологии.

References

1. Бабаченко И.В. и др. Ронколейкин – рекомбинантный интерлейкин-2 человека. ‒ СПб., 2001.
2. Кузнецова И.В. Гиперпластические процессы эндометрия. ‒М., 2009.
3. Куценко И.И. и др. Новые подходы к комплексной терапии рецидивирующих вульвовагинальных кандидозов// Врач и аптека XXI век. ‒2006. ‒ № 2. ‒ С. 24‒25.
4. Нестеров И.М., Тотолян А.А. Иммунокорригирующая терапия инфекционно-воспалительных заболеваний женской половой сферы: Практическое пособие для практикующих акушеров-гинекологов, студентов медицинских ВУЗов, врачей-интернов и клинических ординаторов. – СПб., 2007.
5. Профилактическая нейроиммуноэндокринология / Коновалов С.С., Иль-ницкий А.Н., Горощаев К.И.,
Кветной И.М. ‒ СПб.: Прайм-ЕВРОЗНАК, 2008.
6. Романовский О.Ю. Гиперпластические процессы эндометрия в репродуктивном периоде (обзор литературы) // Гинекология. ‒ 2004. ‒Т. 6, № 6. ‒ С. 296‒302.
7. Тихомиров А.Л., Сарсания С.И. Современные принципы профилактики и лечения воспалительных заболеваний женских половых органов: Метод. рекомендации для врачей акушеров-гинекологов / Под ред. В.Н. Серова. – М., 2005.
8. Anastadiadis P.G. et al. Endometrial polyps: prevalence, detection, and malignant potential in women with abnormal uterine bleeding // Eur. J. Gynaecol. Oncol. ‒ 2000. ‒ 9. Antunes A. Jr. et al. Endometrial polyps in pre- and postmenopausal women: factors associated with malignancy// Maturitas. ‒ 2007. ‒ Vol. 57, № 4. ‒ Р. 415‒421.
10. Atasoy P. et al. Fas-mediated pathway and apoptosis in normal, hyperplastic, and neoplastic endometrium // Gynecol. Oncol. ‒ 2003. ‒ Vol. 91, № 2. ‒ Р. 309‒317.
11. Clark T. J., Neelakantan D., Gupta J. K. The management of endometrial hyperplasia: an evaluation of current practice // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. ‒ 2006. ‒ Vol. 125, № 2. ‒ Р. 259‒264.
12. Hu K., Zhong G., He F. Expression of estrogen receptors ERalpha and ERbeta in endometrial hyperplasia and adenocarcinoma // Int.J. Gynecol. Cancer. – 2005. Vol. 15, № 3. ‒ Р. 537‒541.
13. Kapucuoglu N. et al. Immunohistochemical expression of PTEN in normal, hyperplastic and malignant endometrium and its correlation with hormone receptors, bcl-2, bax, and apoptotic index // Pathol. Res. Pract. ‒ 2007. ‒ Vol. 203, № 3. ‒ Р.153‒162.
14. Kusakabe K. et al. Spontaneous endometrial hyperplasia in the uteri of IL-2 receptor beta-chain transgenic mice // J. Reprod. Dev. ‒ 2009. ‒ Vol. 55, № 3. ‒ P. 273‒277.
15. Novak L. et al. Incidence of endometrial carcinoma in patients with endometrial hyperplasia // Eur. J. Gynaecol. Oncol. ‒ 2005. ‒ Vol. 26, № 5. ‒ P. 561‒563.
16. Rekha K. et al. Apoptosis in endometria of dysfuntional uterine bleeding women// Med. J. Malaysia. ‒ 2005. ‒ Vol. 60, № 1. ‒ Р. 41‒45.
17. Sukhikh G.T. et al. Disorders in cytokine gene expression in endometrial hyperplasia and effect of hormone therapy // Bull. Exp. Biol. Med. ‒ 2005. ‒ Vol. 139, № 2. ‒ P. 235‒237.
18. Tao X.J., Sayegh R.A., Isaacson K.B. Increased natural killer cells and decreased regulatory T cells are seen in complex atypical endometrial hyperplasia and well-differentiated carcinoma treated with progestins // Bull. Exp. Biol. Med. ‒ 2010. ‒ Vol. 41, № 1. ‒ P. 26‒32.

Similar Articles

By continuing to use our site, you consent to the processing of cookies that ensure the proper functioning of the site.