Флуконазол является антимикотиком для системного применения, особенно хорошо зарекомендовавшим себя в лечении микозов, вызванных дрожжами рода Candida. По биохимической структуре флуконазол является производным триазола и функционально относится к высокоактивным селективным ингибиторам синтеза стероидов в клетках грибов. В низких концентрациях флуконазол нарушает биосинтез клеточной мембраны грибов, что приводит к развитию фунгистатического эффекта (задержка роста). При высоких концентрациях вследствие перекисного окисления и других процессов в клетке происходит гибель гриба (фунгицидный эффект). В отличие от других азольных препаратов флуконазол обладает высокой специфичностью по отношению к ферментам гриба, зависимым от цитохрома р=450 [6].
Молекула флуконазола была синтезирована и запатентована компанией Pfizer (США). Позднее, после окончания срока действия патента на фармакологическом рынке появились дженерики, в состав которых также входит флуконазол. Известно, что препараты-дженерики по разным параметрам (биоэквивалентность, биодоступность, фармакинетика и др.) сравнивают с оригинальным препаратом [9].
Цель нашего исследования — оценить фунгицидную активность различных антимикотиков, в состав которых входит флуконазол, на лабораторных культурах различных дрожжей рода Candida.
Материал и методы исследования
В работе использованы оригинальный препарат, содержащий флуконазол — дифлюкан (Pfizer, США) и дженерики флуконазола: дифлазон (KRKA, Словения), флюкостат (Фармстандарт-Лексредства, Россия), микосист (Gedeon Richter, Венгрия), флуконазол (Hemofarm, Сербия), микомакс (Zentiva, Чешская республика). В опытах использовано не менее 5 упаковок препарата одного наименования из различных аптек Москвы. Препараты исследовали в концентрациях 150 и 2 мг/мл. В качестве контроля использовали дифлюкан для внутривенного введения в концентрации 2 мг/мл. Для исследования были использованы тест-штаммы Candida albicans (ВКПМY-3108), Candida glabrata (КБП 3049) и Candidа рarapsilosis (КБП 3050), среда Сабуро и пептонно-глюкозо-дрожжевой агар.
Применен луночно-диффузионный метод. В чашку петри вносили 20 мл агаризованной среды. В центре делали лунку на 2/3 толщины слоя агара. После этого газоном засевали штаммы дрожжей, в лунку вносили препараты в двух концентрациях, как указано выше. инкубацию производили при 37°С в течение 24 ч, после чего проводили измерение зоны подавления роста дрожжевых грибов и фотографирование чашек (рис. 1, см. на вклейке).
Зоны ингибиции роста грибов (полное подавление роста колоний) измеряли в мм. Для контроля зон ингибиции роста проводили микроскопирование фрагментов агара (рис. 2, 3, см. на вклейке).
Результаты исследования и обсуждение
Все исследованные препараты флуконазола тормозили рост трех видов дрожжей в концентрации как 150 мг/мл, так и 2 мг/мл. При этом зоны ингибиции роста дрожжей, образующиеся вследствие воздействия дифлюканом, были, как правило, достоверно больше, чем таковые при воздействии другими препаратами, содержащими флуконазол (см. таблицу).
Во всех экспериментах с C.albicans зоны торможения роста были достоверно больше при воздействии дифлюканом, чем другими препаратами.
Что касается C.parapsilosis, то при концентрации препаратов, равной 150 мг/мл, зоны торможения роста дрожжей были статистически достоверно больше при воздействии дифлюканом, чем другими препаратами. При концентрации препаратов 2 мг/мл оказалось статистически недостоверным различие величины зоны торможения роста при воздействии дифлюканом и микосистом.
В экспериментах с C.glabrata при концентрации препаратов, равной 150 мг/мл, зоны торможения роста дрожжей были статистически достоверно большими при воздействии дифлюканом, чем другими препаратами. При концентрация препаратов 2 мг/мл зоны торможения роста статистически достоверно больше оказались при воздействии дифлюканом по сравнению с флуконазолом, микосистом, микомаксом и флюкостатом.
При сравнительном изучении фунгицидной активности дифлюкана на различные виды дрожжей наиболее чувствительными оказались C.albicans и C.parapsilosis (рис. 4, см. на вклейке).
Различные виды рода Candida, и в первую очередь, Candida albicans, могут вызывать поражения кожного покрова, желудочно-кишечного тракта и половых органов. Кандидозные вульвовагиниты — одна из наиболее частых причин обращения женщин к гинекологу [2]. По данным ряда авторов [1,3,5,8], C.albicans выделяют у 73—90% больных кандидозным вульвовагинитом, C.glabrata — у 15-35%, другие виды дрожжей, в том числе C.parapsilosis, — у 4—19% [8—11]. Этими данными и был обусловлен выбор модельных видов дрожжей для наших экспериментов, в которых исследовалась антимикотическая активность флуконазола.
Важным является вопрос, как интерпретировать полученные результаты. Разница в размере зоны ингибиции роста дрожжей в 1 мм — это много или мало? Особенно при сравнении антимикотической активности препаратов, в состав которых входит флуконазол. В настоящее время единого мнения среди микологов нет. Однако этот вопрос хорошо изучен на примере бактерий. Так, например, если при воздействии на Pseudomonas aeruginose тикарциллином зона торможения роста микроорганизмов ≤14 мм — этот штамм резистентен, а если ≥15 мм — штамм чувствителен к этому препарату [7].
При изучении in vitro фунгицидной активности дифлюкана и его различных дженериков было показано, что этим свойством обладают все исследуемые препараты. Однако проявляется эта активность в различной степени. Наибольшей статистически достоверной фунгицидной активностью на всех трех модельных штаммах как при максимальной, так и при минимальной концентрации обладает дифлюкан. Кроме того, очень важно, что этот препарат тормозит рост штаммов не только C.albicans, но и других видов дрожжей. Достоверно более чувствительными к дифлюкану оказались C.albicans и C. parapsilosis, чем устойчивый к различным антимикотикам C.glabrata [2,10]. Полученные нами данные доказывают, что дифлюкан подавляет рост C.glabrata статистически достоверно более выраженно, чем другие исследуемые препараты, содержащие флуконазол. Сходные результаты при сравнительном изучении фунгицидной активности дифлюкана и некоторых его дженериков были получены и на других видах дрожжей рода Candida и, что важно, другими методами [4].
Таким образом, фунгицидная активность флуконазола в различных препаратах неодинакова. Наибольшей статистически достоверной фунгицидной активностью на всех трех модельных штаммах дрожжей при максимальной (150 мг/мл) и минимальной (2 мг/мл) концентрациях обладает дифлюкан.
Наиболее чувствительными к препарату видами оказалась C.albicans и C.parapsilosis. Он подавляет рост C.glabrata статистически достоверно более выраженно, чем другие препараты.
