Лекарственные препараты на основе женских половых стероидных гормонов занимают ведущее место в профилактике и лечении многих гинекологических заболеваний и акушерской патологии. Однако медикаментозная терапия лекарственными средствами, имеющимися в арсенале врача, не всегда дает ожидаемый эффект, что требует повторного лечения с подбором нового препарата. Персонализированный подход к назначению эффективной гормональной терапии в случаях, трудно поддающихся лечению, позволит избежать негативных последствий необоснованного лечения, сократить экономические затраты на последующую коррекцию возможных осложнений и улучшит качество жизни пациентов. Ранее проведенные нами исследования показали, что клеточные линии, полученные на основе эндометрия человека, могут быть использованы в качестве in vitro модели для изучения и поиска эффективных гестагенных препаратов [1, 2]. Разработка такой модели позволит проводить скрининговый поиск новых лигандов прогестероновых рецепторов, а также изучать молекулярно-клеточные механизмы их фармакологического действия, не сталкиваясь с видовыми различиями в случае использования модельных животных.
Целью исследования явилось изучение возможности использования клеточной модели, полученной из эндометрия человека, для персонализированного подбора препаратов гестагенного ряда.
Материалы и методы. Из биоптатов ткани эндометрия 12 пациенток, находившихся в отделении оперативной гинекологии ФГБНУ «НИИ АГиР им. Д.О.Отта», были получены 12 новых клеточных линий. Эндометриальные клеточные линии (ЭКЛ) выделяли ферментативным путем и культивировали в среде DMEM/F12, содержащей 10% FBS и 1% смеси антибиотиков – PEST (БиолоТ, Россия) (1% пенициллина и 1% стрептомицина). Иммунофенотипирование проводили с помощью проточного цитофлуориметра Beckman Coulter (США). Для кариотипирования использовали QFH метод дифференциального окрашивания. Экспрессию рецепторов прогестерона и эстрогена определяли иммуноцитохимическим методом, а также методом ПЦР. Децидуальную трансформацию ЭКЛ проводили с помощью комбинаций эстрадиола и прогестерона (Sigma-Aldrich), а также его новых аналогов, синтезированных в ФИЦ биотехнологии РАН. Уровни экспрессии пролактина и протеина-1, связывающего инсулиноподобный фактор роста (IGFBP-1), определяли методом ИФА.
Результаты исследования показали, что все полученные ЭКЛ проявляли адгезивные свойства к пластику, имели позитивную экспрессию маркеров СD9, СD13, СD31, СD44, CD73, CD90, CD105, СD146 и негативную – СD34, СD45, HLA-DR (II класса), а также демонстрировали способность трансформироваться в другие типы клеток мезодермы, такие как остеобласты и адипоциты, что указывает на мезенхимное происхождение линий. Во всех ЭКЛ была установлена позитивная экспрессия рецепторов эстрогена и прогестерона, а также нормальный конституционный кариотип. Культивирование ЭКЛ в присутствии цАМФ вызвало децидуальную трансформацию клеток, о чем свидетельствовало увеличение содержания специфических маркеров децидуализации – пролактина и протеина-1, связывающего инсулиноподобный фактор роста, а также изменение клеточной морфологии. При гормональном воздействии на ЭКЛ комбинаций эстрадиола с прогестероном и его аналогами уровни секреции маркеров децидуализации повышались, причем в случае воздействия высокоактивных аналогов прогестерона в большей степени. Установлено, что ЭКЛ проявляли разную чувствительность к гормональному воздействию, а в ряде случаев не подвергались трансформации в децидуальном направлении под действием изучаемых комбинаций гормонов.
Характеристика изученных нами клеточных линий, полученных из эндометрия доноров, позволяет отнести ЭКЛ к мультипотентным мезенхимальным стволовым клеткам человека. Тот факт, что высокоактивные гестагены вызывают клеточную децидуализацию в ЭКЛ, проявивших чувствительность к гормональному воздействию, в большей степени, чем прогестерон, согласуется с результатами исследований, полученных на модельных животных [3]. Таким образом клеточная модель на основе эндометрия человека может оказаться полезной для персонализированного подбора препаратов гестагенного ряда.
Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проект 18-015-00449-А).
