Введение. Гемостаз играет важную роль в процессе имплантации бластоцисты, а его изменение ведет к неэффективности ЭКО [1]. Тромбоциты тесно связаны с плазменным гемостазом, их активация приводит к запуску каскада свертывания с образованием фибринового сгустка [2]. Оценка гиперактивации тромбоцитов затруднительна, так как широко применяемый оптический метод агрегации тромбоцитов ориентирован на диагностику тромбоцитопатий и контроль применения антиагрегантов [3]. Современный тест функциональной активности тромбоцитов (ФАТ) с помощью метода проточной цитофлуориметрии (ПЦ) дает полную информацию о функциональном состоянии тромбоцитов, а также их способности к активации в присутствии агонистов [4].
Цель: оценить клеточный гемостаз у женщин в программе ЭКО методом ПЦ и сравнить результаты с оптическим методом агрегации тромбоцитов.
Методы. В исследование были включены 14 женщин репродуктивного возраста с бесплодием трубно-перитонеального или мужского генеза, у которых было две и более неудачных попыток ЭКО в анамнезе. Оценку ФАТ производили перед вступлением в программу ЭКО (2–4-й день менструального цикла) и в день переноса эмбриона. Забор крови осуществляли вакуумной системой SARSTEDT («Сарштедт», Германия) с цитратом натрия 3,2% из локтевой вены, исследование проводили в течение 1 ч с момента взятия крови. Поверхностные рецепторы и внутриклеточные гранулы определяли с помощью моноклональных антител к CD61 (PE), CD42b (PE), PAC1 (FITC), CD62P (Alexa 647) и аннексину V (Alexa 647). Общее количество антигена оценивали по интенсивности флуоресценции нативных и активированных тромбоцитов смесью АДФ, активаторов тромбинового рецептора SFLLRN (PAR1) и AYPGKF (PAR4). Пробы анализировали на цитометре Gallios (Beckman Coulter, США). Количество «прокоагулянтных» тромбоцитов оценивали от общего числа клеток, несущих на своей поверхности фосфатидилсерин (аннексин V, ФС). Одновременно с методом ПЦ применяли оптический метод агрегации тромбоцитов с АДФ 1×10-5 («Технология-Стандарт») на агрегометре (CHRONO-LOG Corporation, США). Статистическую обработку результатов проводили с использованием U-критерия Манна–Уитни.
Результаты. В исследуемой группе женщин количество интегрина ß3 (CD61) и GP-1b (CD42b) на поверхности тромбоцитов в покое и после активации было выше референсных значений, полученных на популяции здоровых женщин в точках 1 и 2 (p<0,05). Уровень IIbIIIa (PAC1) на нативных клетках в первой точке был ниже референсных значений (p<0,0001), однако превысил их во второй (p<0,05). В программе ЭКО у женщин наблюдается увеличение PAC1 относительно базового уровня (p<0,007). Прокоагулянтная активность (ФС) покоящихся и активированных тромбоцитов имела тенденцию к увеличению (p<0,05). Количество и секреция тромбоцитарных гранул в исследуемой группе оставались в пределах нормы. Методом оптической агрегации изменений функциональной активности тромбоцитов у женщин в программе ЭКО обнаружено не было (p>0,05).
Выводы. Выявлены предактивация и нарастание гиперактивации тромбоцитов у женщин в программе ЭКО. Метод ПЦ обладает большей чувствительностью по сравнению с оптическим методом агрегации и поэтому является вариантом предпочтительного выбора.
