Цель исследования
Выявление предикторов готовности эндометрия к нидации бластоцисты на основании молекулярно-генетической и морфологической оценки рецептивности эндометрия у пациенток с бесплодием.
Материалы и методы
Было проведено гистологическое и молекулярно-генетическое исследование уровня экспрессии мРНК генов LIF, GPX3, AQP3, NDRG1, GNLY, IMPA2, PAEP, IGFBP1, HABP2, DPP4, TAGLN, IL15, POSTN, HLA-DOB, MSX1 методом ОТ-ПЦР в эндометрии, полученном от 104 пациенток, планирующих перенос размороженных эмбрионов с помощью пайпель-биопсии на 7–8 день после пика ЛГ в естественном цикле (ЕЦ) с последующим проведением программы криопереноса. Все пациентки имели регулярный менструальный цикл, нормальный ИМТ 22,3 (3,0), средний возраст составил 34 (4,4). Согласно критериям включения, все пациентки имел в среднем 3,7 (2,5) криоконсервированных эмбриона. По результатам молекулярно-генетического исследования был проведен кластерный анализ и разработана модель стадирования развития эндометрия. Так же проведена оценка исходов программы ВРТ относительно стадии созревания эндометрия и выявлен наиболее благоприятный период для успешной имплантации и пролонгировании беременности. Достоверность межгрупповых различий определялась с помощью критерия Фишера.
Результаты
Ранняя стадия фазы секреции была установлена в 30,8% случаев (n=32); средняя стадия фазы секреции – в 69,2% (n=72) по данным гистологического исследования. Кластерный анализ молекулярно-генетических особенностей экспрессии генов в образцах в период предполагаемого «окна имплантации», позволил выделить 4 кластера образцов: кластер А, кластер В, кластер С, кластер D. При сопоставлении с гистологическим исследованием образцы эндометрия для кластера А (n=20) в одинаковом соотношении разделились между ранней и средней стадиями фазы секреции и характеризовались высоким уровнем экспрессии генов POSTN, HLA-DOB, MSX1 и низким уровнем экспрессии мРНК генов LIF, GPX3, AQP3, NDRG1, GNLY, IMPA2, PAEP, IGFBP1, HABP2, DPP4 и TAGLN. Кластер С в более чем 65% случаев соответствовал средней стадии фазы секреции, для кластеров В и D установлена средняя стадия фазы секреции более чем в 80% случаев. Промежуточные уровни экспрессии были выявлены в кластерах В (n =31) и С (n=36). И наконец для кластера D (n=17) установлена высокая экспрессия мРНК генов GPX3, AQP3, NDRG1, GNLY, IMPA2, PAEP, IGFBP1, HABP2, DPP4 и TAGLN и низкая экспрессия генов POSTN, HLA-DOB, MSX1. Таким образом, на основании изменения уровня гена PAEP, экспрессия которого увеличивается под действием прогестерона, предложено кластерное стадирование созревания эндометрия от кластера к кластеру: А → С → В → D. После проведения программы переноса размороженных эмбрионов частота положительного результата ß-ХГ составляла от 23,5 до 40% без статистически значимых различий между кластерами. Однако, была выявлена статистически значимая разница по частоте клинической беременности и родов живым плодом, в кластерах В и С и составила 9 и 10 случаев (29% и 27,8% соответственно), когда молекулярно-генетический профиль эндометрия соответствовал промежуточному этапу развития между раннеи среднесекреторной трансформацией эндометрия (pa-b=0,008, pa-c=0,010).
Заключение
Исследование молекулярно-генетических профилей экспрессии мРНК LIF, GPX3, AQP3, NDRG1, GNLY, IMPA2, PAEP, IGFBP1, HABP2, DPP4, TAGLN, IL15, POSTN, HLA-DOB, MSX1 генов позволяет верифицировать стадию развития эндометрия наиболее благоприятную для имплантации бластоцисты.
Развитие ВРТ открывает новые горизонты в лечении бесплодных пар. Однако, даже при высоком качестве эмбрионов не всегда удается достичь беременность. Для повышения вероятности наступления беременности в программах ЭКО, важно учитывать синхронность развития эмбриона и эндометрия перед проведением переноса бластоцисты в полость матки у пациенток с безуспешными попытками в анамнезе. Поэтому актуальным вопросом остается определение периода «готовности» эндометрия для имплантации. На сегодняшний день не существует общепринятых молекулярно-генетических критериев оценки «окна имплантации», таким образом, исследования в этом направлении остаются весьма перспективными.
The development of ART opens up new horizons in the treatment of infertile couples. However, even with high quality embryos, pregnancy is not always possible. To increase pregnancy rate in IVF programs, it is important to take the synchronize development of the embryo and endometrium before transferring the blastocyst into the uterine cavity in patients with a recurrent implantation failure. There are no generally accepted molecular genetic criteria for evaluating the “window of implantation”, so studies in this direction remain very promising.
